Question

6．如图是某转基因烟草的培育过程，箭头表示相关限制酶的酶切位点．请据图分析回答：

（1）已知几种限制酶识别序列及其切割位点如表所示：

限制酶	BamHⅠ	HindⅢ	EcoRⅠ	SmaⅠ
识别序列及 其切割位点

图中①、②过程为减少质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，并使插入片段尽可能小，应选用限制酶EcoRI和HindⅢ对外源DNA、质粒进行切割．图中所示的质粒分子经Sma I切割后含有2个游离的磷酸集团．若需要对Sma I切割过后的末端进行连接，应使用    DNA连接酶处理．
（2）经⑥过程形成不同的组织器官，是细胞分裂和分化的结果．

Answer 1

分析 分析题图：图示表示转基因烟草的培育过程，①是含有目的基因的外源DNA分子；②是质粒，可作为基因工程的运载体；③表示基因表达载体的构建过程；④表示采用农杆菌转化法将目的基因导入受体细胞；⑤表示脱分化过程；⑥表示再分化过程．

解答 解：（1）限制酶SmaI位于目的基因中，用此酶切割会破坏目的基因．所以为减少质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，并使插入片段尽可能小，应选用限制酶EcoRI和HindⅢ对外源DNA、质粒进行切割．图中质粒只含有一个限制酶Sma I的切割位点，所以图示质粒分子经Sma I切割后含有2个游离的磷酸集团．Sma I切割过后形成的是平口末端，T₄DNA连接酶可以连接平末端．
（2）经⑥过程形成不同的组织器官，是细胞分裂和分化的结果．
故答案为：
（1）EcoRI和HindⅢ2个   T4 
（3）分裂和分化

点评 本题结合转基因烟草的培育过程图，考查基因工程的应用、PCR技术的原理和条件、植物组织培养过程等知识，要求考生识记基因工程的操作步骤和植株组织培养过程，能准确判断图中各数字表达的含义，结合图中质粒和外源DNA分子的含有酶切位点的情况，选择合适的限制酶进行切割．