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    17．GDNF是一种神经营养因子，对损伤的神经细胞具有营养和保护作用．研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图1所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究．请回答：
    （1）在分离和培养大鼠神经干细胞的过程中，使细胞分散开常用的酶是胰蛋白酶或胶原蛋白酶．
    （2）构建含GDNF基因的表达载体时，需选择图1中的XhoI限制酶进行酶切．
    （3）经酶切后的载体和GDNF基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有三种：单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接（如图1所示）．为鉴定这3种连接方式，选择HpaI酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切，并对酶切后的DNA片段进行电泳分析，结果如图2所示．图中第②泳道显示所鉴定的载体是反向连接的．
    （4）将正向连接的表达载体导入神经干细胞后，为了检测GDNF基因是否成功表达，可用相应的抗体与提取的蛋白质杂交．当培养的神经干细胞达到一定的密度时，需进行传代培养以得到更多数量的细胞，用于神经干细胞移植治疗实验．

    分析 1、基因工程技术的基本步骤：
    （1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
    （2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
    （3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
    （4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．
    2、动物细胞培养的过程：取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→放入二氧化碳培养箱培养．

    解答 解：（1）动物细胞培养时，可用胰蛋白酶或胶原蛋白酶作用，使细胞分散开．
    （2）质粒上有XhoⅠ识别位点，而且在启动子之后，所以选用XhoⅠ限制酶进行酶切．
    （3）泳道①仅有一种条带，属于载体自连；泳道②有两种条带，且长度分别与质粒和GDNF基因长度相同，为正向连接；泳道③有两种条带，长度与BamHⅠ酶切后结果相同，为反向连接．
    （4）检测基因是否表达采用抗原抗体杂交法．培养动物细胞采用动物细胞培养法，当细胞密度达到一定程度，需要进行分瓶，进行传代培养．
    故答案为：
    （1）胰蛋白酶或胶原蛋白酶
    （2）XhoI
    （3）②
    （4）抗体   传代

    点评 本题考查基因工程、动物细胞培养的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作工具及操作步骤等，掌握各步骤中的相关细节，能结合所学的知识准确判断各选项．

    练习册系列答案
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    让植株①和②杂交得到③，再将③分别作如图所示处理。有关分析正确的是

    A．获得⑨和⑩植株的原理是相同的

    B．若⑤植株是二倍体，则⑧和⑩植株的体细胞中所含染色体组数相等

    C．由③到④的过程中产生的变异一般都有利于生产

    D．由③到⑦的过程中发生了等位基因的分离

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    科目：高中生物 来源： 题型：选择题

    8．使遗传因子组成为AaBbCc和AABbCc的向日葵杂交，按基因自由组合定律，后代中基因型为AABbCC的个体所占的比例应为（　　）
    A．$\frac{1}{8}$B．$\frac{1}{16}$C．$\frac{1}{32}$D．$\frac{1}{64}$

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    A．水稻的早熟和晚熟是一对相对性状B．狗的直毛和卷毛是一对相对性状
    C．纯合子自交后代一定是纯合子D．杂合子自交后代一定是杂合子

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    科目：高中生物 来源： 题型：选择题

    12．如图是单克隆抗体制备流程的简明示意图．下列有关叙述，正确的是（　　）
    A．①是从已免疫的小鼠脾脏中获得的B淋巴细胞
    B．②中使用胰蛋白酶有利于杂交瘤细胞的形成
    C．③同时具有脾脏细胞和鼠骨髓瘤细胞的特性
    D．④若是只经一次筛选获得的杂交瘤细胞，便即可大量增殖，又能产生特异性抗体

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    科目：高中生物 来源： 题型：选择题

    2．下列生理过程和现象中，能发生“ATP$\stackrel{酶}{→}$ADP+Pi+能量”反应的是（　　）
    A．氨基酸进入肝细胞B．塑料袋中土豆变酸
    C．小肠绒毛上皮细胞吸收甘油D．植物根尖成熟区细胞吸水

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    9．为研究果实贮藏效率与O2浓度的关系，将质量相同的苹果果肉放在O2浓度不同的密闭容器中，一小时后测定O2吸收量和CO2释放量，结果如下表，据表回答以下问题：
    O2相对量（%）01235710152025
    O2吸收量（mol）00.10.20.30.40.50.60.70.81.1
    CO2释放量（mol）1.00.80.60.50.40.50.60.70.81.0
    （1）在氧气浓度为3%时，每小时葡萄糖有氧分解量为0.05mol，在氧气浓度为5%时，每小时葡萄糖无氧分解量为0mol．
    （2）根据以上实验结果分析，仓库中贮藏苹果时，O2相对浓度在5%时较好．

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    下列有关酶的叙述正确的一组是

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    ②酶都能被蛋白酶水解而失去其活性；

    ③酶都只能催化一种物质的化学反应；

    ④酶通过降低活化能来提高化学反应速率；

    ⑤低温、高温、过酸、过碱都会使酶永久失活；

    ⑥酶的催化效率高是因为其降低活化能的作用显著；

    ⑦同一种酶可在分化程度不同的活细胞中；

    ⑧冬季动物体内酶的活性随环境温度的下降而降低；

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    A．原肠胚时期，内细胞团表层的细胞形成外胚层
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