Question

下图是利用质粒（有抗四环素基因、抗氨苄青霉素基因和Sal I、BamH I、Hind Ⅲ三种限制酶切割位点）获得转基因抗盐烟草的培育过程，请据图回答有关问题：

（1）将抗盐基因导入烟草细胞内，使烟草植株产生抗盐性状，这种新性状的产生所依据的原理是           。从基因文库中获得的抗盐基因可用          技术进行扩增。

（2）如果将抗盐基因直接导入烟草细胞，一般情况下，烟草不会具有抗盐特性，原因是抗盐基因在烟草细胞中不能               ，也不能合成抗盐基因的mRNA。

（3）为了确定抗盐烟草是否培育成功，既要用放射性同位素标记的             作探针进行分子杂交检测，又要用一定浓度的盐水浇灌的方法从个体水平鉴定烟草植株的耐盐性。

（4）图中将抗盐基因导入质粒，需用             限制酶对质粒和                 进行切割。

（5）烟草组织细胞具有                 ，因此，可以利用组织培养技术将导入抗盐基因的烟草组织细胞培育成植株。图中①、②依次表示组织培养过程中香蕉组织细胞的              、                    。在形成愈伤组织的过程中，细胞的新陈代谢类型是                 。

Answer 1

(1) 基因重组（1分）    PCR （1分）

(2) 复制（2分）  

(3) 抗盐基因（2分）

(4) Sal I和Hind III（2分）   含抗盐基因的DNA  （2分）

(5) 全能性（1分）   脱分化（1分）    再分化（1分）     异养需氧型（2分）

考查基因工程的知识。BamHI的酶切位点在目的基因（抗盐基因）中。若用此限制酶，会破坏目的基因的结构，最终得不到转基因抗盐烟草，所以选用 SalⅠ和HindⅢ对质粒和含抗盐基因的DNA进行切割。由于SalⅠ和HindⅢ的酶切位点在抗四环素基因中。在构建重组质粒时，抗四环素基因结构遭到破坏，故只能在培养基中加入氨苄青霉素来筛选导入重组质粒的农杆菌。采用植物组织培养技术可将植物细胞培育成完整的植株。植物组织培养过程中，愈伤组织经细胞增殖和分化形成完整植株，此过程须向培养基中加入植物激素（如生长素和细胞分裂素）。