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2.下列对PCR过程的叙述中,不正确的是(  )
A.PCR过程中DNA解旋所需的温度最高
B.一次循环可使目的基因的量增加一倍
C.需要耐高温的DNA聚合酶
D.需要耐高温的解旋酶

分析 解答本题需识记有关PCR技术的相关知识:
1、概念:PCR全称为聚合酶链式反应,是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术.
2、原理:DNA复制.
3、前提条件:要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一对引物.
4、过程:PCR反应过程是:变性→复性→延伸
①高温(90℃以上)变性:双链DNA解聚为单链;
②低温(50℃左右)复性:两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合;
③中温(72℃左右)延伸:合成子链.TaqDNA聚合酶有最大活性,可使DNA新链由5'端向3'端延伸.

解答 解:A、PCR过程中DNA解旋所需的温度最高(90℃以上),A正确;
B、PCR过程中DNA数量的增加呈指数增长,所以一次循环可使目的基因的量增加一倍,B正确;
C、PCR反应需要高温使DNA变性解旋,所以要用耐高温的DNA聚合酶,C正确;
D、PCR技术中,DNA双链的解开不需要解旋酶,是利用高温使其变性解旋,D错误.
故选:D.

点评 本题考查PCR技术的相关知识,要求考生识记PCR技术的概念、原理、条件及过程等基础知识,能结合所学的知识准确判断各选项.

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14.将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗,饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力.以下是与植物疫苗制备过程相关的图.

表一引物对序列表
 引物对A P1  AACTGAAATGTAGCTATC
 P2  TTAAGTCCATTACTCTAG
 引物对B S1  GTCCGACTAGTGGCTCTC
 S2  AGCTGGCGTTTAGCCTCC
表二:几种限制酶识别序列及切割位点表
限制酶AluEcoRIPstISmaI
切割位点AG↓CTG↓AATCCTGCA↓GCCC↓CCC
TC↑GACTTAA↑GG↑ACGTCGGG↑CCC
请根据以上图表回答下列问题.
(1)在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中,使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶,其最主要的特点是耐高温.
(2)PCR过程中退火(复性)温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定.表1根据模板设计的两对引物序列,图2为引物对与模板结合示意图.请判断哪一对引物可采用较高的退火温度?引物对B.
(3)为将外源基因转入马铃薯,图1步骤6转基因所用的细菌B通常为农杆菌,鉴定目的基因是否整合到细胞染色体上的方法是DNA分子杂交技术.
(4)构建符合要求的重组质粒T时需要用到的酶是限制酶和DNA连接酶酶,重 组质粒T时需要具备目的基因、复制原点、启动子、终止子和标记基因,标记基因的作用是鉴别受体细胞是否含有目的基因
(5)符合设计要求的重组质粒T进行酶切,假设所用的酶均可将识别位点完全切开,请根据图1中标示的酶切位点和表2所列的识别序列,对以下酶切结果作出判断.
①采用EcoRI和PstI酶切,得到2种DNA片断.
②采用EcoRI和SmaI酶切,得到1种DNA片段.

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