Question

1．科学家利用土壤农杆菌把编码霍乱毒素的无毒性β链的基因转移到苜蓿细胞，再将其培养成幼苗，食用这种苜蓿苗后，霍乱毒素β链很快被喉、肠胃等部位的分泌性粘液细胞吸收，刺激特异性抗体的大量产生，使机体获得对霍乱的免疫．其具体过程如下：

（1）构建重组DNA分子常用的工具酶是限制酶和DNA连接酶，基因工程中构建基因表达载体的目的是使目的基因在宿主细胞中稳定地复制并表达．
（2）图中过程②采用的方法是农杆菌转化法，Ti质粒上有一个tms片段能促进生长素的大量合成，在对Ti质粒改造时要将该片段去除，其原因是防止植物（苜蓿）体内生长素浓度过高而抑制植物（苜蓿）生长．
（3）该实验中将农杆菌转入苜蓿细胞的原生质体后，需再生细胞壁，实验室检测原生质体是否再生出细胞壁的方法是将细胞置于高渗溶液中，观察是否发生质壁分离．
（4）含目的基因的苜蓿细胞通过植物组织培养技术培养，经过脱分化、再分化两个重要阶段能发育成幼苗．

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）构建重组DNA分子常用的工具酶是限制酶和DNA连接酶，基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤，目的是使目的基因在宿主细胞中稳定地复制并表达．
（2）图中过程②为目的基因导入的方法，采用的方法是农杆菌转化法，Ti质粒上有一个tms片段能促进生长素的大量合成，在对Ti质粒改造时要将该片段去除，其原因是  防止植物（苜蓿）体内生长素浓度过高而抑制植物（苜蓿）也长．
（3）原生质体长出细胞壁才会发生质壁分离，故实验室检测原生质体是否再生出细胞壁的方法是将细胞置于高渗溶液中，观察是否发生质壁分离．
（4）含目的基因的苜蓿细胞通过植物组织培养技术培养，经过分化、再分化两个重要阶段能发育成幼苗．

故答案为：
（1）限制酶和DNA连接酶   使目的基因在宿主细胞中稳定地复制并表达
（2）农杆菌转化法  防止植物（苜蓿）体内生长素浓度过高而抑制植物（苜蓿）生长
（3）将细胞置于高渗溶液中，观察是否发生质壁分离
（4）脱分化   再分化

点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节问题，能结合所学的知识准确判断各选项．