Question

某研究小组进行药物试验时，以动物肝细胞为材料，测定药物对体外培养细胞的毒性。供培养的细胞有甲、乙两种，甲细胞为肝肿瘤细胞，乙细胞为正常肝细胞。请回答下列有关动物细胞培养的问题：

（1）将数量相等的甲细胞和乙细胞分别置于培养瓶中培养，培养液及其它培养条件均相同。一段时间后，观察到甲细胞数量比乙细胞数量____，因为甲具有____特点。

（2）动物细胞培养时，常在合成培养基中加入适量血清，其原因是____。细胞培养应在含5%CO₂的恒温培养箱中进行，CO₂的作用是____。

（3）在两种细胞生长过程中，当乙细胞铺满瓶壁时，其生长____。药物试验需要大量细胞，两种细胞频繁传代，甲细胞比乙细胞可以传代的次数更____。若用动物的肝脏组织块制备肝细胞悬液，需用____消化处理。

（4）为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的____。如细胞培养过程中要保存细胞，则通常在____条件下，因为在这种条件下，细胞中____________的活性降低，细胞____________的速率降低。

（5）已知癌基因X过量表达与肝肿瘤的发生密切相关，要试验一种抗肿瘤药物Y对甲细胞生长的影响，可将甲细胞分为A、B两组，A组细胞培养液中加入____，B组细胞培养液中加入无菌生理盐水，经培养后，从A、B两组收集等量细胞，通过分别检测X基因在A、B两组细胞中的____或____合成水平的差异，确定Y的药效。

Answer 1

（1）多 快速增殖
（2）血清可以补充合成培养基中缺乏的物质  维持培养液pH
（3）停止　多 胰蛋白酶
（4）抗生素   冷冻(或超低温、液氮) 　酶 　　新陈代谢
（5）Y  mRNA  蛋白质
肝肿瘤细胞壁正常肝细胞的分裂能力强，细胞周期短，在其他条件相同时，相同时间内产生的子代细胞多，在动物细胞培养的过程中，需要加入适宜血清可以补充培养基中缺乏的物质，而5%CO₂的作用可以起到缓冲物质作用，维持培养液pH；正常动物细胞在培养瓶中培养是存在接触抑制现象，当铺满瓶壁时就停止生长，肿瘤细胞则没有接触抑制现象，而且可以更多次的进行传代；培养瓶中加入抗生素可以抑制细菌的活动；（5）中要设计的实验是要实验抗肿瘤药物Y对甲细胞生长的影响，所以A、B两组肯定是一组加入Y，一组不加；而肿瘤细胞与一般细胞之间的在合成水平上的差异在于肿瘤细胞会合成较多的蛋白质，同时也会形成较多的mRNA。