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    4．研究被石油污染过的土壤中细菌数量，并从中筛选出能分解石油的细菌．为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员利用被石油污染过的土壤，对分解石油的细菌进行分离和提纯，回答下列相关问题．
    （1）配置好的培养基通常可以使用高压蒸汽灭菌．培养基的营养成分包括水、无机盐、碳源和氮源等．其中碳源应该以石油为唯一碳源．
    （2）纯化菌种时，为了得到单个菌落，常采用的接种方法有两种，即平板划线法和稀释涂布平板法．
    （3）该实验中使用的是固体培养基，要得到固体培养基，应在培养基中加入琼脂做凝固剂．
    （4）为了对土壤中分解石油的细菌进行计数，科研人员把不同稀释度的菌液进行涂布（每个平板加0.1毫升菌液）、培养、计数．统计结果发现稀释倍数为103的三个平板中，菌落数分别为45、38、37．问每克土壤中能分解石油的细菌数约为4×105个．酵母菌细胞中有成形的细胞核这是酵母菌与分解石油的细菌在结构上的最大区别．
    （5）若用15N对分解石油的细菌的DNA进行标记，然后把这个细菌放在含14N培养基中培养，让其连续分裂四次，则后代中，含15N的DNA的细菌和含14N的DNA的细菌之比为1：8．若把分解石油的细菌的DNA提取出来用DNA酶处理得到的产物是脱氧核糖核苷酸．

    分析 1、无菌操作技术有消毒和灭菌，消毒有煮沸消毒法、巴氏消毒法和化学药剂消毒法，灭菌有灼烧灭菌法适用于接种工具、干热灭菌法适用于玻璃器皿和金属工具、高压蒸汽灭菌法适用于培养基及容器的灭菌．
    2、接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法，平板划线分离法：由接种环以菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落．
    稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞．计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内．
    3、DNA分子的复制方式是半保留复制．

    解答 解：（1）培养基通常采用高压蒸汽灭菌法灭菌．培养基的营养成分包括水、无机盐、碳源和氮源等．筛选出能分解石油的细菌，则培养基中的碳源应该以石油为唯一碳源．
    （2）纯化菌种时，常采用的接种方法有两种，即平板划线法和稀释涂布平板法．
    （3）该实验中使用的是固体培养基，要得到固体培养基，应在培养基中加入琼脂做凝固剂．
    （4）根据题意，每升水样中的活菌数为（45+38+37）÷0.1×1000×103=4×105个．酵母菌属于真核生物，细菌属于原核生物，真核细胞与原核细胞在结构上最主要的区别是真核细胞有成形的细胞核．
    （5）DNA分子的复制方式为半保留复制，且一个细菌含有一个拟核DNA分子．若用15N对分解石油的细菌的DNA进行标记，然后把这个细菌放在含14N培养基中培养，让其连续分裂四次，则后代中，含15N的DNA的细菌有2个，含14N的DNA的细菌有24，因此两者之比为2：16=1：8．DNA的基本组成单位是脱氧核苷酸，因此把分解石油的细菌的DNA提取出来用DNA酶处理得到的产物是脱氧核糖核苷酸．
    故答案为：
    （1）高压蒸汽、氮源、石油
    （2）平板划线法、稀释涂布平板法
    （3）琼脂
    （4）4×105、成形的细胞核
    （5）1：8、脱氧核糖核苷酸

    点评 本题考查微生物的分离和培养、DNA复制等知识，要求考生识记培养基的成分、种类及作用；识记接种微生物接种常用的两种方法及无菌技术；掌握DNA分子半保留复制的相关计算，能结合所学的知识准确答题．

    练习册系列答案
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