尿素是一种重要的农业肥料.但若不经细菌的分解.就不能更好地被植物利用.生活在土壤中的微生物种类和数量繁多.同学们试图探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用.设计了以下实验.并成功筛选到能高效降解尿素的细菌.培养基成分如下表所示.实验步骤如下图所示.请分析回答.KH2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2O葡萄糖尿素琼脂1．4g2．1g0．2g10g1g1 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

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尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，同学们试图探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌（目的菌）。培养基成分如下表所示，实验步骤如下图所示。请分析回答。

KH2PO4	Na2HPO4	MgSO4·7H2O	葡萄糖	尿素	琼脂
1．4	g	2．1	g	0．2	g	10	g	1	g	15	g

将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL。

（1）按物理性质分，此培养基属于______ 。

（2）培养基中加入尿素的目的是，这种培养基属于培养基。

（3）“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的和，实验需要振荡原因是。

（4）图中将细菌转到固体培养基上时，可采用____________接种，获得单菌落后继续筛选。

（5）在实验中，下列材料或用具需要灭菌的是，需要消毒的是。（填序号）

①培养细菌用的培养基与培养皿

②玻棒、试管、锥形瓶和吸管

③实验操作者的双手

（6）在进行分离分解尿素的细菌实验时，A同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的实验结果产生的原因可能有____________（填序号）。

①土样不同 ②培养基污染

③操作失误 ④没有设置对照

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	B．	②促进细胞融合可利用聚乙二醇（PEG）或灭火病毒诱导
	C．	④中的筛选是通过放射性活荧光标记的抗原与抗体特异性结合进行的
	D．	⑤可以无限增殖产生大量单克隆抗体，⑥运用了动物细胞培养技术

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17．融合PCR技术是采用具有互补末端的引物，将不同来源的扩增片段连接起来的方法，其过程如图1所示．图2是中间载体1和中间载体2（利用融合PCR技术构建成）构建成叶绿体定点整合表达载体示意图（限制酶酶切位点标注于载体外侧），叶绿体定点整合表达载体通过与叶绿体基因的同源重组，将目的基因整合于叶绿体DNA上的特定位点上．请据图回答下列问题．

（1）图1第一阶段中PCR至少进行2次循环，才能获得双链等长的DNA，第二阶段中引物2与引物3部分碱基的互补配对关系使得两DNA能成功“搭桥”连接起来．
（2）若通过融合PCR技术将启动子、标记基因、目的基因、终止子拼接起来，需要设计8种引物，其中能够起着“搭桥”作用的引物有6种．
（3）图2中需使用Spe I、Sal I（填限制酶）和DNA连接酶将两中间载体构建成定点整合表达载体，途中定点整合表达载体上未标出的结构是复制原点．
（4）叶绿体定点整合表达载体中叶绿体同源重组基因1和叶绿体同源重组基因2（填基因）能使目的基因准确插入叶绿体DNA上的特定位点上．与利用农杆菌转化法相比，利用定点整合表达载体将目的基因导入叶绿体中的优点是能实现定点整合到叶绿体中，且不易随花粉扩散带来安全问题．

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4．

某生物兴趣小组试图探究牛和山羊的瘤胃中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能降解尿素的细菌（目的菌）．培养基成分如表所示，实验步骤如图所示．请分析回答问题：

KH₂PO₄	1.4g
Na₂HPO₄	2.1g
MgSO₄•7H₂O	0.2g
葡萄糖	10g
尿素	1g
琼脂	15g
溶解后自来水定容到1000mL

（1）从培养基的物理性质分析，该培养基属于固体培养基；从培养基的用途分析，该培养基属于选择培养基．
（2）在实验过程中：①培养基、培养皿；②玻棒、试管、锥形瓶、吸管；③瘤胃中液体；④涂布器．其中需要灭菌是①、②、④（填序号）．
（3）分离分解尿素的细菌实验时，甲同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落．甲同学坚信自己的实验结果是准确的，则甲同学的实验结果产生差异的原因最可能是①（填序号）
①取样不同 ②培养基污染 ③操作失误 ④没有设置对照
（4）为确定实验中微生物属于尿素分解菌，可在培养基中加入酚红指示剂，若菌落变成红色，说明瘤胃中的微生物能分解酵素．理由是细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，PH增高，使酚红指示剂变红．
（5）为进一步确定取自瘤胃中液体的适当稀释倍数，将接种的培养皿放置在37°C恒温培养箱中培养24h～48h，观察并统计具有红色环带的菌落数，结果如表，其中10⁶或10⁵倍的稀释比较合适．