Question

【题目】在农业生产中发现一种广泛使用的除草剂（含氮有机化合物）在土壤中不易降解，长期使用可污染土壤。为修复被该除草剂污染的土壤，可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌（已知该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明）。

（1）制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行稀释处理。现有1L土壤浸出液，用无菌吸管吸取1mL样液至盛有9mL无菌水的试管中，依次稀释103稀释度。各取0．1mL已稀释103倍的水样分别接种到三个培养基上培养，记录的菌落数分别为55、56、57，则每升原土壤浸出液样中菌体数为________ 。

（2）要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，从用途方面来看，上述培养皿中培养基的成分特点是________________________________________________________________________。

（3）接种技术的核心是__________，是研究和应用微生物的前提。在划线接种时，连续划线的目的是将聚集的菌种逐步_____________,培养时，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是______________________或有氧条件抑制了这些细菌的生长。

（4）在培养基上形成的菌落中，无透明带菌落利用的氮源主要是________，有透明带菌落利用的氮源主要是________，据此可筛选出目的菌。实验结果如图显示的A～E五种菌株中，________是最理想菌株。

（5）科研人员用放射线处理该细菌获得两个突变株A和B，然后对突变株A和B进行实验，结果如下表所示：

接种的菌种	一般培养基	实验处理及结果
A	不生长	添加营养物质甲，能生长
B	不生长	添加营养物质乙，能生长
A+B	能生长	不添加营养物质甲、乙就能生长

突变株A不能在一般培养基上生长的原因是________________________。突变株A和B混合在一起接种于一般培养基中能生长的最可能原因是___________________________________。

Answer 1

【答案】（1）5．6×108

（2）在无氮培养基中添加了该除草剂

（3）防止杂菌污染， 保证培养物的纯度 稀释获得单个菌落 培养基中缺少这些细菌可利用的氮源

（4）氮气 该除草剂 E

（5）突变株A缺乏合成营养物质甲所需要的酶 突变株A生长需要营养物质甲，突 变株B可以提供；突变株B生长需要营养物质乙，突变株A可以提供

【解析】

试题分析：（1）图中稀释的倍数是108，三个菌落的平均数=（55+56+57）÷3=56，则每毫升样品中菌株数=56÷1×108=5．6×109个，所以每升土壤浸出液中的菌株数=5．6×109×103=5．6×1012个。

（2）该除草剂为含氮有机物，为了选育能降解该除草剂的细菌，应采用唯一氮源的选择培养基，即无氮的固体培养基中添加该除草剂．

（3）接种技术的核心是无菌操作，防止杂菌污染，保证培养物的纯度．在划线接种时，连续划线的目的是将聚集的菌种逐步稀释获得单个菌落，培养时，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长，原因是培养基缺少这些细菌可利用的氮源．

（4）由于该除草剂的培养基不透明，被菌落分解后可产生透明带，无透明带说明除草剂未被分解，菌落利用的氮源就只能是空气中的氮气了；而出现透明带说明除草剂被分解，菌落是分解该除草剂的细菌，氮源是该除草剂；E透明圈最大，故是最理想菌株。

（5）突变株A的生长依赖于营养物质甲，突变株B的生长依赖于营养物质乙．不添加营养物质甲和乙，二者混合培养时都能生长，最可能的原因是突变株A为突变株B提供了营养物质乙，突变株B为突变株A提供了营养物质甲。