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    采集的卵母细胞在体外经人工培养成熟后，才能与获能的精子受精。以下原因不正确的是

    [     ]

    A．卵细胞也要经历类似精子获能的过程
    B．动物排出的卵子成熟程度不同
    C．卵母细胞体外人工培养至减数第二次分裂中期时，才具有与精子受精的能力
    D．冲出的卵子由小变大还需要培养一段时间
    D
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    科目：高中生物 来源： 题型：

    2008年1月7日，东北农业大学培育出我国第二代绿色荧光蛋白转基因克隆猪。研究人员是先从一种特殊水母中提取绿色荧光蛋白基因，然后把该基因经过处理后转移到培养的猪胎儿成纤维细胞的基因组中，再把转基因体细胞的细胞核移植到成熟的去核猪卵母细胞中构建成转基因胚胎。再经过手术移植入受体母猪，经过发育最终获得绿色荧光蛋白转基因克隆猪。

    下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图。请据图回答：

       （1）过程①和②必需用到的酶是          。

       （2）重组质粒除了带有绿色荧光蛋白基因以外，还必须含有                才能构成一个完整的基因表达载体。

       （3）为了获得更多的猪卵母细胞，可通过对母猪注射          的方法，做超数排卵处理，并将所采集到的卵母细胞在体外培养到         期即可通过显微操作将其细胞核去除。

       （4）早期胚胎的培养液成分较复杂，除一些无机盐和有机盐类外，还需添加维生素．激素．氨基酸．核苷酸等营养成分，以及       等物质。

       （5）如果想同时得到多头绿色荧光蛋白转基因克隆猪，可通过胚胎分割技术得以实现。但应选择发育良好．形态正常的              期胚胎进行操作，且要注意                  ，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。

       （6）与一般的繁育良种动物方式相比较，胎胎移植的优势是                       。

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    科目：高中生物 来源：2011届吉林省吉林一中高三冲刺（一）（理综）生物部分 题型：综合题

    2008年1月7日，东北农业大学培育出我国第二代绿色荧光蛋白转基因克隆猪。研究人员是先从一种特殊水母中提取绿色荧光蛋白基因，然后把该基因经过处理后转移到培养的猪胎儿成纤维细胞的基因组中，再把转基因体细胞的细胞核移植到成熟的去核猪卵母细胞中构建成转基因胚胎。再经过手术移植入受体母猪，经过发育最终获得绿色荧光蛋白转基因克隆猪。
    下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图。请据图回答：

    （1）过程①和②必需用到的酶是         。
    （2）重组质粒除了带有绿色荧光蛋白基因以外，还必须含有               才能构成一个完整的基因表达载体。
    （3）为了获得更多的猪卵母细胞，可通过对母猪注射         的方法，做超数排卵处理，并将所采集到的卵母细胞在体外培养到        期即可通过显微操作将其细胞核去除。
    （4）早期胚胎的培养液成分较复杂，除一些无机盐和有机盐类外，还需添加维生素．激素．氨基酸．核苷酸等营养成分，以及      等物质。
    （5）如果想同时得到多头绿色荧光蛋白转基因克隆猪，可通过胚胎分割技术得以实现。但应选择发育良好．形态正常的             期胚胎进行操作，且要注意                ，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。
    （6）与一般的繁育良种动物方式相比较，胎胎移植的优势是                      。

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    科目：高中生物 来源：2014届黑龙江省高二下学期期末考试生物试卷（解析版） 题型：综合题

    2008年1月7日，东北农业大学培育出我国第二代绿色荧光蛋白转基因克隆猪。这项技术为家猪的目标育种、人类疾病医疗模型猪的建立以及生产为人类器官移植提供器官的特殊家猪提供了可靠技术平台。结合基因工程技术和胚胎工程技术回答问题：

    （1）基因工程是在           水平上进行设计和施工的，实现操作过程至少需要三种工具，即           、             和载体。

    （2）若想获取转基因克隆猪的目的基因可从基因文库中获取、            技术扩增及DNA合成仪人工合成。

    （3）基因工程的核心是                          。

    （4）为了获得更多的猪卵母细胞，可通过对母猪注射          的方法，做超数排卵处理，并将所采集到的卵母细胞在体外培养到      期即可通过显微操作将其细胞核去除。

    （5）若对获得的转基因克隆猪作检测与鉴定，首先要检测的是                      ，这是目的基因能否在受体细胞中稳定遗传的关键。

     

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    科目：高中生物 来源：2010年广东省汕头市高二下学期期中试题生物卷 题型：综合题

    2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白(GFP)方面做出突出贡献的科学家。绿色荧光蛋白能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪在东北农业大学的种猪场自然分娩产出，这标志着我国在转基因克隆猪技术领域已达到世界领先水平。下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图回答：

    （1）图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制性内切酶切取目的基因、切割质粒。若限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是一G↓GATCC一，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC一。在质粒上有酶I的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。

    ①请画出质粒被限制酶I切割后所形成的黏性末端。

     

     

    ②在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来? ＿＿＿＿＿。理由是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

    （2）GFP基因与目的基因一起构建到载体上不影响目的基因的表达，也不影响由目的基因控制合成的蛋白质的结构与功能,且对细胞无毒性作用，因此GFP基因可以运用作为基因表达载体上的＿＿＿＿＿＿。

    （3）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也最有效的方法是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。然后还要通过＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿技术来检测绿色荧光蛋白基因是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的染色体DNA上。

    （4）为了获得更多的猪卵母细胞，可通过对母猪注射＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿的方法，做超数排卵处理，并将所采集到的卵母细胞在体外培养到＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿期即可通过显微操作将其细胞核去除。

    （5）早期胚胎的培养液成分较复杂，除一些无机盐和有机盐类外，还需添加维生素、激素、＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿等物质。

    （6）绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程属于＿＿＿＿＿＿生殖。目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是：＿＿＿＿＿＿(用数字表示)。

    ①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸序列

    ②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计

    ③蓝色荧光蛋白基因的修饰(合成)

    ④表达出蓝色荧光蛋白

     

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