Question

【题目】某研究所以马尾藻岩藻聚糖（SF）为研究对象，体外培养小鼠肉瘤细胞S180，做抗肿瘤活性实验的研究。下列为部分实验步骤与结果。

实验步骤：

①将S180肿瘤细胞以RPMI1640为培养液，在5%CO2培养箱中培养。

②将上述培养过的S180肿瘤细胞经酶消化，按1×103～1×105个·mL-1接种到96孔培养板，适宜条件下培养24h、48h、72h、96h后，以MTT法（又称比色法，一种检测细胞存活和生长的方法）于波长490nm处测定OD值，结果如图1。

③在适宜的培养条件和恰当的S180肿瘤细胞接种浓度下，研究不同浓度（0mg·mL-1、0．1mg·mL-1、0．5mg·mL-1、1mg·mL-1、2mg·mL-1、4mg·mL-1、8mg·mL-1、10mg·mL-1、15mg·mL-1、20mg·mL-1、25mg·mL-1、30mg·mL-1）的SF对S180肿瘤细胞增殖的抑制情况，96h后以MTT法于波长490nm处测定OD值，结果如图2。

请回答下列问题：

（1）步骤①中以RPMI1640为培养液培养S180肿瘤细胞的原理是__________。培养液中除细胞所需的营养物质之外，通常还添加一定量的__________，以防培养过程中的污染。

（2）步骤②中“消化”所使用的酶是__________，为减少OD值测定的误差，应注意__________。

（3）已知在一定细胞数目范围内，MTT法测得的OD值与活细胞数量呈正相关，由图1可知步骤③中恰当的S180肿瘤细胞接种浓度为__________个·mL-1。

（4）图2实验结果表明，在一定范围内SF浓度与细胞增殖的抑制作用呈__________（选填“正相关”或“负相关），当SF浓度达到__________mg·mL-1时细胞增殖的抑制作用达到极限，继续增加SF浓度对细胞增殖的抑制作用变化不明显。

Answer 1

【答案】细胞增殖 抗生素 胰蛋白酶（或胶原蛋白酶） 多测量，取平均值 5×103 正 25

【解析】

（1）动物细胞培养的原理：细胞增殖。动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养；动物细胞培养需要满足以下条件：①无菌、无毒的环境：培养液和培养用具应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加定量的抗生素，以防培养过程中的污染。此外，应定期更换培养液，以便清除代谢产物防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害。②营养：合成培养基成分：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。在使用合成培养基时通常需加入血清、血浆等一些天然成分。③温度和PH。④气体环境：细胞所需的气体主要是O2和CO2。

（2）根据题干信息，在一定细胞数目范围内，MTT法测得的OD值与活细胞数量呈正相关，图2表示S180肿瘤细胞在不同浓度SF作用下生长曲线，SF浓度越大OD值越小，肿瘤细胞的数量越少，说明SF抑制肿瘤细胞的增殖。

（1）培养肿瘤细胞的原理是细胞增殖。培养液中除细胞所需的营养物质之外，通常还添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。

（2）步骤②中“消化”所使用的酶是胰蛋白酶，其作用是使动物组织细胞分散开，以获得细胞悬液。在实验中求平均值可以减少实验误差，所以为减少OD值测定的误差,应注意多次测量并求平均值。

（3）已知在一定细胞数目范围内，MTT法测得的OD值与活细胞数量呈正相关，所以由图1可知步骤③中恰当的S-180肿瘤细胞接种浓度为5×103个·mL-1。

（4）图2实验结果表明，在一定范围内，SF浓度与细胞增殖的抑制作用呈正相关，当SF浓度达到25mg·mL-1时细胞增殖的抑制作用达到极限，继续增加SF浓度对细胞增殖的抑制作用变化不明显。