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    【题目】科学家经过长期研究发现了nemuri基因有促进睡眠的功能。nemuri基因编码的NEMURI蛋白由果蝇大脑中的神经元分泌，具有抗菌活性。目前，科学家采用基因工程技术，生产NEMURI蛋白药物。请回答：

    （1）在获取nemuri基因时，若nemuri基因核苷酸数少，核苷酸序列已知，可以通过______________（仪器）用化学方法直接人工合成。

    （2）若从果蝇的基因文库中获取nenuri基因，构建基因组文库时，需要用到的酶有_________________________________________;构建cDNA文库时，还需要用到的酶是_________________________。cDNA文库中的基因______________填（“含有"或“不含有"）启动子。

    （3）若用PCR技术扩增nemuri基因，前提是要有一段_________________________序列，以便于研究者根据此序列设计引物。与细胞内DNA复制相比，PCR技术所需要的酶是_________________________。

    （4）构建含有nemuri基因的表达载体是本研究的核心，本研究中构建的基因表达载体，只包含复制原点、启动子、nemuni基因和终止子，原因是_________________。

    【答案】DNA合成仪 限制酶和DNA连接酶 逆转录酶 不含有 已知目的（nemuri）基因的核苷酸 热稳定DNA聚合酶（Taq酶） nemuri基因编码的NEMURI蛋白具有抗菌活性，可做为标记基因

    【解析】

    基因工程的操作步骤：获取目的基因（基因文库、PCR、人工合成）；构建基因表达载体（含标记基因、启动子、终止子、目的基因、复制原点等）；把目的基因导入受体细胞（显微注射法、农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法、钙离子处理法）；目的基因的检测和鉴定（分子水平和个体水平检测，前者包括DNA分子杂交、分子杂交和抗原抗体杂交；后者如抗虫抗病接种实验）。

    （1）基因工程中，若目的基因核苷酸数少，核苷酸序列已知，可以通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成。

    （2）构建基因组文库时，需要用到的酶有限制酶（对DNA进行切割）和DNA连接酶（连接黏性末端或平末端）；构建cDNA文库时，提取的mRNA需要在逆转录酶的作用下合成DNA，cDNA文库中的基因不含有启动子。

    （3）若用PCR技术扩增基因，前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便于研究者根据此序列设计引物，用于子链的延伸。PCR需要热稳定DNA聚合酶（Taq酶）的催化。

    （4）根据题干信息，nemuri基因编码的NEMURI蛋白具有抗菌活性，可作为基因表达载体中的标记基因，故构建的基因表达载体中不包括另外的标记基因。

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    （3）实验的第二个月期间，所有小区的浮游植物生物量均显著下降，主要原因是此时生长旺盛的水稻与浮游植物之间具有_________关系。

    （4）放养鱼增加了该生态系统中 _________的复杂性，从而增加了该生态系统中_________的速率。

    （5）除了上述因素之外，对该实验研究影响最大的不定因素是 _________（填序号）。

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