Question

【题目】（一）（1）制作泡菜时，为缩短发酵周期，腌制前可加入乳酸菌，用___________蘸取少量的菌悬液，在MRS 乳酸菌专用培养基的平板上划线，以获得单菌落，单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选______________的最简单的方法之一。

（2）下图所示的划线分离操作，正确的是________。

（3）为筛选胞外a淀粉酶分泌型菌种，一般从米酒厂周围获得土样,用无菌水稀释，涂布到含有淀粉的选择培养基上培养，一段时间后在培养基表面滴加_______，可在菌落周围观察到透明的水解圈。若要筛选酶活性较高的菌种,需挑选若干个___________与菌落直径比值大的菌落，分别利用________培养基振荡培养进行扩增。然后将培养液离心，取上清液用于检测酶活性。

（二）嗜热土壤芽孢杆菌产生的β-葡萄糖苷酶(BglB)是一种耐热纤维素酶,为使其在工业生产中更好地应用, 利用大肠杆菌表达BglB酶，开展了以下试验。（图中启动子与RNA聚合酶结合，终止子是给予RNA聚合酶转录终止信号的DNA序列）

（1）_________扩增bglB基因时，选用嗜热土壤芽孢杆菌基因组DNA作模板。

（2）如下图为质粒限制性核酸内切酶切图谱，为使获得的bglB基因与质粒载体连接， bglB基因两端需分别含有___和___不同限制酶的识别序列。

（3）将重组DNA分子导入受体细胞，为了促进该过程，应该用氯化钙处理大肠杆菌，其目的是________________。

（4）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述构建好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为_____________________________________________。

（5）下列有关限制性核酸内切酶的叙述中正确的是（________）

A.用限制性核酸内切酶切割一个DNA分子中部，获得一个目的基因时，被水解的磷酸二酯键有2个

B.限制性核酸内切酶识别的序列越短，则该序列在DNA中出现的概率就越大

C.- CATG ↓-和一G↓ GATCC- -序列被限制性核酸内切酶切出的粘性末端碱基数不同

D.只有用相同的限制性核酸内切酶处理含目的基因的片段和质粒，才能形成重组质粒

Answer 1

【答案】接种环 高表达菌株 B 碘液 水解圈直径 液体 PCR NdeⅠ BamHⅠ 增加大肠杆菌细胞壁的通透性 转基因的大肠杆菌分泌出有活性的BglB酶 B

【解析】

阅读题干信息可知，该题考查的知识点较多，综合性较强，涉及到微生物的培养以及两种接种方法、基因工程的几个基本步骤及其注意事项等，回忆和梳理相关知识点，根据题目逐步分析答题。

（一）（1）根据题意分析，接种方法为平板划线法，应该有接种环蘸取少量的菌悬液，在MRS 乳酸菌专用培养基的平板上划线，以获得单菌落；单菌落的分离是是用于筛选高表达菌株的最简单的方法之一。

（2）平板划线法应该多次划线，且每一次划线都从上一次划线的末端开始，因此A图很难得到由单个细胞发育而来的菌落，A错误；B图每一次划线从上次划线末端开始，容易得到由单个细胞发育而来的菌落，B正确；C图划线没有从上次划线的末端开始，不能得到由单个细胞发育而来的菌落，C错误；D图划线不是从上次划线末端开始，不容易得到由单个细胞发育而来的菌落，D错误。

（3）淀粉遇碘变蓝，而a淀粉酶分泌型菌种产生的a淀粉酶能够催化淀粉水解，则水解后遇碘不能变蓝，在菌落周围形成透明的水解圈；水解圈越大，说明菌种分解淀粉的能力越强，因此若要筛选酶活性较高的菌种，需挑选若干个水解圈直径与菌落直径比值大的菌落，分别利用液体培养基振荡培养进行扩增。

（二）（1）基因工程中，扩增目的基因（bglB基因）常用方法是PCR技术。

（2）据图分析，图示基因表达载体上有多个多种限制酶切割位点，但是目的基因必须插入启动子与终止子之间，且不能破坏启动子、终止子、标记基因等部位，因此要将目的基因插入该表达载体只能用NdeⅠ、BamHⅠ两种限制酶进行切割，则bglB基因两端需分别含有这两种限制酶的识别序列。

（3）将目的基因导入大肠杆菌等微生物细胞时，需要用钙离子处理，增加大肠杆菌细胞壁的通透性，使其成为感受态，以便目的基因的导入。

（4）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述构建好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，是因为转基因的大肠杆菌分泌出了有活性的BglB酶。

用限制性核酸内切酶切割一个DNA分子中部，获得一个目的基因时，需要切割目的基因的两侧，因此被水解的磷酸二酯键有4个，A错误；限制性核酸内切酶识别的序列越短，则该序列在DNA中出现的概率就越大，B正确；-CATG↓-和一G↓GATCC- -序列被限制性核酸内切酶切出的粘性末端碱基数都是4个，C错误；用两种不同的限制酶切割目的基因的两侧以及质粒，也能形成重组质粒，D错误。