多环芳香烃是一类高毒性有机污染物.由于具有致癌物和致突变性而受到关注．实验小组从土壤中分离出能降解PAHs的细菌.并对其进行培养和计数．请回答下列问题:(1)实验小组从富含PAHs的土壤中取样后.放置在以PAHs为唯一碳源的培养基上培养.其目的是增加PAHs分解菌的浓度.以确保能够从样品中分离出目的菌．(2)将PAHs降解菌的菌液稀释105倍� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

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1．多环芳香烃（PAHs）是一类高毒性有机污染物，由于具有致癌物和致突变性而受到关注．实验小组从土壤中分离出能降解PAHs的细菌，并对其进行培养和计数．请回答下列问题：
（1）实验小组从富含PAHs的土壤中取样后，放置在以PAHs为唯一碳源的培养基上培养，其目的是增加PAHs分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离出目的菌．
（2）将PAHs降解菌的菌液稀释10⁵倍后取0.1mL分别涂布在3个平板中，经培养，3个平板上的菌落数分别是79个、57个和41个，则样液中的活菌数是5.9×10⁷个/mL．也可以在显微镜下采用血细胞计数板直接计数的方法统计样液中PAHs降解菌的数量．
（3）若采用平板划线法分离样液中的PAHs降解菌，操作时接种环通过灼烧灭菌．在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌液不宜过多，其原因是菌液过多会出现积液，导致菌体堆积而不能获得单个细菌形成的菌落．示意图A和B中，图B表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果．

（4）若某一实验组平板上菌落的平均数为201个，而空白对照组的1个平板上出现了3个菌落，该结果说明这次实验可能出现了杂菌污染．

分析 1、无菌操作技术有消毒和灭菌，消毒有煮沸消毒法、巴氏消毒法和化学药剂消毒法，灭菌有灼烧灭菌法适用于接种工具、干热灭菌法适用于玻璃器皿和金属工具、高压蒸汽灭菌法适用于培养基及容器的灭菌．
2、接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法，平板划线分离法：由接种环以菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落．
稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞．计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内．

解答解：（1）从土壤中分离出能降解PAHs的细菌需要使用选择培养基，即需要使用以PAHs为唯一碳源的培养基上培养，增加PAHs分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离出目的菌．
（2）根据题意可知，样液中的活菌数是（79+57+41）÷3÷0.1×10⁵=5.9×10⁷个/mL．计数还可以采用血小板计数板直接计数的方法统计样液中PAHs降解菌的数量．
（3）实验时，接种环需要采用灼烧灭菌的方法进行灭菌．在涂布平板时滴加到培养基表面的菌液过多会出现积液，导致菌体堆积而不能获得单个细菌形成的菌落．
（4）据图分析可知，A平板是平板划线法得到，B平板中的菌落均匀，是稀释涂布平板法得到的．空白培养的培养基上有菌落说明培养基被杂菌污染，所得到的数据没有意义．
故答案为：
（1）增加PAHs分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离出目的菌
（2）5.9×10⁷ 血细胞计数板
（3）灼烧菌液过多会出现积液，导致菌体堆积而不能获得单个细菌形成的菌落 B
（4）杂菌污染

点评微生物这部分内容是高考试题的一个热点一般体现在对微生物的筛选、培养和灭菌，考察的知识点有微生物的无菌操作、微生物的分离以及产品的提取，注意总结．

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