Question

图为某种质粒表到载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，amp^R为青霉素抗性基因，tct^R 为四环素抗性基因，P启动子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。

据图回答：

（1）将含有目的基因的DNA与质粒该表达载体分别用EcoRI酶切，酶切产物用ＤＮＡ连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有       、         、   

      三种 。若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行        。

（2）用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是         ；

（3）在上述实验中，为了防止目的基因和基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是                。

Answer 1

（１）目的基因－载体连接物　　载体－载体连接物　目的基因－目的基因连接物　　　　分离纯化（每空２分，共８分）

（２）载体－载体连接物（２分）　　目的基因－载体连接物（１分）　　载体－载体连接物（１分）

（３）启动子　　mRNA (每空２分，共４分)

（４）EcoRI和BamHI（２分）（只答一个酶不给分）

解析:

考查基因表达载体的构建的相关知识。

（1）连接酶连接黏性末端时，是不区分质粒还是目的基因的，所以可产生目的基因—载体连接物、载体—载体连接物、目的基因—目的基因连接物。要想得到分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行分离纯化。

（2）在含四环素的培养基中，因为酶切位点破坏四环素抗性基因tct^r，所以只有载体—载体连接产物才可能存在。含青霉素的培养基中，酶切位点没有破坏青霉素抗性基因amp^r，只要含有目的基因—载体连接物、载体—载体连接物都可以生存。

（3）同时选用两种酶之后，目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的黏性末端不相同，就不会发生任意链接。