Question

【题目】在盛产柿子的某地，生物小组开展柿子酒、柿子醋生产的相关活动。

(1)土壤中的酵母菌计数：

在秋季的柿子园中，落地柿子流出的果汁的周围土壤中有酵母菌大量生长繁殖。

①用灭过菌的小铁铲、信封取该处土样、并在__________旁称取l0g土样，加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。而后进行系列稀释操作：吸取锥形瓶中土壤液的上清液__________ mL，转移至盛有9mL无菌水的大试管中充分摇匀，依次等比稀释，获得稀释至101、102、103、104倍的土壤液的稀释液。

②为测定土壤中酵母菌的数量，选用第①步中所获得的102、103、104倍的土壤液的稀释液，并依次分别吸取0.1 mL进行平板涂布操作。在适宜条件下培养，当菌落数目稳定时，对各稀释度涂布的三个平板进行菌落计数（如下表）。

则每克土壤样品中的酵母菌数量约为____个。要使该实验所得数据可靠，还应该实施的操作是____ 。

(2)柿子醋生产菌的制备：

为去掉酵母菌，挑取变酸的柿子酒内的菌膜于____C进行纯化培养，获得下图所示菌落分布。应从____（填“甲”、“乙”或“丙”）区域中挑取部分菌落制玻片观察，选择所需菌种。

(3)柿子酒、柿子醋的制作（发酵装置如上图所示）：

①排气口弯管设置的目的是________________________________。

②柿子醋可在柿子酒生产的基础上改变__________进行生产。

Answer 1

【答案】 火焰 1 1.75×107 同时在各稀释度组中，另加一个平板接种无菌水作为对照 3035 丙 在酒精发酵时用来排出CO2，防止空气中微生物的污染 菌种和环境条件

【解析】（1）①为了避免微生物的污染，用灭过菌的小铁铲、信封取该处土样、并在火焰旁称取10g土样，加入盛有90ml无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。而后进行系列稀释操作：吸取锥形瓶中土壤液的上清液1ml，转移至盛有9ml无菌水的大试管中充分摇匀，依次等比稀释，获得稀释至101、102、103、104倍的土壤液的稀释液。

②由于一般选择菌落数在30-300的平板进行计数，因此选择“稀释度103倍”进行计算，每克土壤样品中的酵母菌数量约=（178+191+156）÷3÷0.1×103×102÷10=1.75×107个。要使该实验所得数据可靠，还应该实施的操作是同时在各稀释度组中，另加一个平板接种无菌水作为对照。

（2）酵母菌适宜生存的温度为18～25℃，为去掉酵母菌，挑取变酸的柿子酒内的菌膜（醋酸菌）于3035℃进行纯化培养，获得图1所示菌落分布。丙中已形成单个菌落，因此需要从丙区域中挑取部分菌落制玻片观察，选择所需菌种。

（3）①排气口弯管设置的目的是在酒精发酵时用来排出C02，防止空气中微生物的污染。

②可通过装置中的出料口对发酵情况进行及时监测．此时，若采用血细胞计数板对发酵液的酵母菌观察计数，与（1）中计数方法相比，该计数方法测得的酵母菌数目较多。

③柿子醋可在柿子酒生产的基础上改变菌种和环境条件进行生产，即菌种由酵母菌改为醋酸菌，环境条件由无氧、18～25℃改为通入氧气、30～35℃。