Question

【题目】酒曲中含有大量的微生物，其中有霉菌、酵母菌和细菌等。某研究小组尝试使用蔗糖豆芽汁培养基从酒曲中分离酵母菌。请回答下列问题：

（1）培养基是分离酵母菌的关键。配置培养基时，先将200.0g豆芽洗净，放入水中煮沸30min，用纱布过滤，取豆芽汁加30.0g蔗糖，并补水分至1000mL。酵母菌在该培养基中生长较霉菌_________。研究小组分析认为还应在培养基中添加0.5%乳酸，研究小组的依据是__________。

（2）用灭菌的小刀切开曲块，从内部取一小块加入一管培养基中，摇动后将该管置于__________℃培养箱中培养，两天后适量转移到另一管培养基中。转移培养3～4次。

（3）可采用___________________方法分离纯化培养基中的酵母菌。使用该方法所用的培养基需重新配置，且必须在培养基中添加适量的______________。

（4）研究小组查阅资料发现，酵母菌发酵时，当酒精含量达到12～16%时，发酵就停止了，其原因是_________________。研究小组进一步进行了实验以确定所分离的其中1株酵母菌对酒精的最高耐受浓度，其实验的设计思路是________。

Answer 1

【答案】 快 酸性条件下酵母菌可以生长繁殖，细菌则受到抑制 18～25 稀释涂布平板法（或平板划线法） 琼脂 酒精对细胞有毒害作用 配置含有一系列酒精浓度梯度（包含12～16%）的培养基，分别接种所分离的酵母菌，在相同且适宜的条件下培养一段时间后，观察记录培养基中菌落的生长情况，超过最高耐受浓度后，酵母菌不能生长。

（或：使用分离的酵母菌进行酒精发酵实验，每隔一段时间，测定发酵液的酒精浓度，当酒精浓度不再增加时，即可确定所分离的酵母菌对酒精的最高耐受浓度。）

【解析】【试题分析】

本题考查使用蔗糖豆芽汁培养基从酒曲中分离酵母菌的相关知识。酒曲中含有大量的微生物，其中有霉菌、酵母菌和细菌等，蔗糖豆芽汁培养基可以用来培养酵母菌和霉菌，使它们与细菌分离开来。酵母菌多数为腐生，一般生长在含糖较高，偏酸的环境中，在通气条件下，液体培养比霉菌快。对初步分离出的酵母菌进行稀释、涂布、多次划线而使各种菌体得以分开，形成单菌落。据此答题。

（1）蔗糖豆芽汁培养基属于液体培养基，在通气条件下，液体培养中的酵母菌比霉菌生长快；酸性条件下酵母菌可以生长繁殖，细菌则受到抑制，因此可在培养基中添加0.5%乳酸，以造成酸性环境。

（2）培养酵母菌是适宜温度是18～25℃。

（3）可采用稀释涂布平板法（或平板划线法）分离纯化培养基中的酵母菌；采用该方法所用的培养基是固体培养基，所以必须重新配置培养基，且在培养基中添加适量的琼脂做凝固剂。

（4）酒精对细胞有毒害作用，所以酵母菌发酵时，当酒精含量达到12～16%时，发酵就会停止；要进一步确定所分离的其中1株酵母菌对酒精的最高耐受浓度，可配置含有一系列酒精浓度梯度（包含12～16%）的培养基，分别接种所分离的酵母菌，在相同且适宜的条件下培养一段时间后，观察记录培养基中菌落的生长情况，超过最高耐受浓度后，酵母菌不能生长。