Question

14．家蚕细胞具有高效表达外源基因的能力．将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养，可提取干扰素用于制药．
（1）进行转基因操作前，需用胰蛋白（或胶原蛋白）酶短时处理幼蚕组织，以便获得单个细胞．
（2）为使干扰素基因在家蚕细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的启动子和终止子之间．
（3）采用PCR技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞．该PCR反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液（含Mg²⁺）、水、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、引物和Taq 酶（热稳定DNA聚合酶．

Answer 1

分析 1、基因工程的基本操作步骤主要包括四步：①目的基因的获取；②基因表达载体的构建；③将目的基因导入受体细胞；④目的基因的检测与表达．从分子水平上检测目的基因的方法：（1）分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．
2、PCR技术的条件：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）等．

解答 解：（1）为了使动物组织分散开为单个细胞通常用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理．
（2）基因表达载体包括启动子、终止子、目的基因和标记基因．启动子位于目的基因的首端，终止子位于目的基因的尾端．
（3）PCR反应体系的主要成分应该包含：扩增缓冲液（含Mg²⁺）、水、4种脱氧核糖苷酸、模板DNA、TaqDNA聚合酶和一对DNA引物；在PCR反应过程中，有一个环节是从较高的温度冷却到相对较低的55℃左右，其作用让引物结合到互补DNA链上，形成局部双链．
故答案为：
（1）胰蛋白（或胶原蛋白）　
（2）启动子　终止子
（3）脱氧核糖核苷酸  引物　Taq 酶（热稳定DNA聚合酶）

点评 本题考查基因工程、细胞工程等相关知识，着重识记动物细胞培养和PCR技术的有关内容，意在考查考生的识记能力和应用能力，属于容易题．