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    10．科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长．质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶切割位点，如图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（ampr为抗氨苄青霉素基因），其中①～④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞．请据图作答：

    （1）利用PCR技术扩增鱼的抗冻蛋白基因，向反应的试管中添加模板DNA、四种脱氧核苷三磷酸（dNTP）、
    引物和热稳定DNA聚合酶．
    （2）基因工程的核心是构建基因表达载体，进行这项操作时，为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用限制酶PstⅠ、SmaⅠ同时对含鱼抗冻蛋白基因的DNA和质粒进行切割，切割后用DNA连接酶酶处理．
    （3）在培养基中的添加氨苄青霉素，来筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，筛选后，为了进一步确定是否含目的基因，用DNA分子杂交方法检测是否有目的基因．通常采用抗原-抗体杂交技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质，在这项技术中的鱼的抗冻蛋白是抗原（抗原或抗体）．

    分析 分析图解：鱼的抗冻蛋白基因上具有三种限制酶切割位点，PstⅠ酶的切割位点存在于目的基因的两侧，SmaⅠ酶的切割位点存在于目的基因的左侧，而AluⅠ酶的切割位点存在于目的基因的中央，因此不宜选用AluⅠ酶．质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶切割位点，在选择限制酶时一般选择同种限制酶，以便形成相同的黏性末端．图中①～④分别表示：基因表达载体的构建、目的基因导入受体细胞、脱分化、再分化．

    解答 解：（1）利用PCR技术扩增DNA时所需的条件：引物、模板DNA、原料（4种脱氧核糖核苷酸）、引物和耐热性的DNA聚合酶等．
    （2）基因工程的核心是构建基因表达载体，在构建基因表达载体中，如果目的基因和载体用同一种限制酶切割，获得的黏性末端相同，将会发生目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接（或目的基因自连、质粒自连），故应选用不同的限制酶分别对目的基因和载体切割，以获得不同的黏性末端．由于AluⅠ酶的切割位点存在于目的基因的中央，因此不宜选用AluⅠ酶，则应选用PstⅠ和SmaⅠ对含鱼抗冻蛋白基因的DNA、质粒进行切割．
    （3）将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法，在培养基中的添加氨苄青霉素，来筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞．在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质，通常采用抗原-抗体杂交技术，在这项技术中的鱼的抗冻蛋白是抗原．
    故答案为：
    （1）引物   热稳定DNA聚合酶
    （2）构建基因表达载体   PstⅠ、SmaⅠ
    （3）氨苄青霉素 　   抗原-抗体杂交　  抗原

    点评 本题结合图解，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、工具及操作步骤，能准确判断图中各过程的含义，再结合图中信息准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查．

    练习册系列答案
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    科目：高中生物 来源： 题型：选择题

    14．下列有关健康人神经调节方面的叙述不正确的是（　　）
    A．成年人能有意识排尿说明高级中枢可以控制低级中枢
    B．神经调节参与血糖调节时需要通过垂体
    C．婴儿尿床，但婴儿的脊髓骶部的排尿中枢正常
    D．神经细胞受到刺激时Na+从细胞外到细胞内依赖膜蛋白

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    科目：高中生物 来源： 题型：选择题

    1．下列有关脂质的描述正确的是（　　）
    A．脂质是由C、H、O三种元素组成
    B．脂肪的作用只有保温和缓冲减压
    C．维生素D能够促进人体对钙和磷的吸收，所以在补钙的时候需要补充一定量的维生素D
    D．性激素是一种蛋白质类激素，它可以促进人和动物生殖器官的发育以及生殖细胞的形成

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    科目：高中生物 来源： 题型：解答题

    18．请分析回答下列有关微生物方面的问题：
    （1）微生物培养基一般都含有水、无机盐、碳源和氮源等营养要素，另外还要有适宜的外界条件，如适宜的温度、PH和氧气的有无等．
    （2）在微生物接种过程中，试管口需要通过酒精灯火焰，其目的是灭菌．
    （3）某同学用稀释涂布平板法测定一个土壤样品中的细菌数（取10g该土壤加90ml无菌水制成稀释液）．在对应稀释倍数为106的培养基中统计3个平板上的菌落数分别为：121、212、256．则每克该土壤样品中的菌落数为1.96×109．
    （4）分离分解尿素的微生物的实验流程包括：土壤取样、梯度稀释、样品涂布到选择培养基上、挑选菌落．
    （5）无菌技术主要通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染．实验室中常用的消毒方法有化学药剂消毒法和紫外线消毒法．常用的灭菌方法有灼伤灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌．
    （6）根据如表所示为某微生物培养基的配方，回答：
    成分含量成分含量
    NaNO33gFeSO40.01g
    K2HPO41g（CH2O）30g
    琼脂15gH2O1 000ml
    MgSO4•7H2O0.5g青霉素0.1万单位
    依物理性质，该培养基属于固体培养基．依用途划分，则属于选择培养基．根据培养基原料，所培养微生物的同化作用的类型是异养型，培养的微生物可能 是酵母菌或霉菌．该培养基中的碳源是（CH2O）．不论何种培养基，在各成分都溶化后分装前，要进行的是先调整pH．

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    5．如图为豌豆的一对相对性状遗传实验过程图解，请仔细读图后回答下列问题：

    （1）在该实验的亲本中，父本的性状是矮茎豌豆，母本的性状是高茎豌豆．
    （2）操作①叫去雄操作②叫授粉（传粉）．
    （3）高茎（A）对矮茎（a）为显性，则杂种种子种下去后，长出的豌豆植株表现为高茎．
    （4）若亲代皆为纯合体，让F1进行自交，F2性状中高茎与矮茎之比为3：1，F2的遗传因子组成类型及其比例为AA：Aa：aa=1：2：1．生物体的这种现象称作性状分离．

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    15．请根据下列反应式回答：
    ATP$?_{另一种酶}^{酶}$ADP+Pi+能量
    （1）上述反应从左向右进行时，能量用于进行各种（或项）生命活动．
    （2）上述反应从右向左进行时，能量被贮存在ATP（或的高能磷酸键）中．
    （3）在动物和人体内，ADP转化为ATP时所需的能量主要来自细胞呼吸（作用）；在绿色植物体内，所需的能量还可来自光合作用（两空都填生理过程）．

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    2．“肺炎双球菌的转化实验”证明了DNA是遗传物质，而蛋白质不是遗传物质．得出这一结论的关键是（　　）
    A．从死亡小白鼠体内分离获得了S型细菌
    B．用S型活细菌和加热杀死后的R型细菌分别对小白鼠进行注射，并形成对照
    C．将S型细菌的各种因子分离并分别加入到各培养基中，培养R型细菌，观察是否发生转化
    D．用杀死的S型细菌与无毒的R型细菌混合后注射到小白鼠体内，测定小白鼠体液中抗体的含量

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    19．1958年美国科学家斯图尔德（F．C．Steward）取胡萝卜韧皮部的一些细胞，放入含有植物激素、无机盐和糖类等物质的培养液中培养，结果形成一个细胞团，继而长出了根、茎和叶，移栽后最终长成了一株新的胡萝卜植株，这个实验属于植物组织培养．下列说法不正确的是（　　）
    A．该实验能够成功的理论依据是分化的细胞依然具有全能性
    B．植物组织培养过程中有细胞的分裂过程，没有细胞分化过程
    C．植物组织培养可以应用于快速繁殖花卉和种植蔬菜等作物
    D．目前还不可以用类似的方法将已分化的动物体细胞培养成新个体

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    20．下面是《抗A、抗B血型定型试剂（单克隆抗体说明书）》部分内容，则下列说法中，不正确的是（　　）
    A．该定型试剂（单克隆抗体）是通过动物细胞融合技术制备的，通常采用的生物诱导剂是灭活的病毒
    B．制备过程中，首先用A型血或者B型血的红细胞作为抗原反复注射给实验动物
    C．与传统工艺相比，本试剂的突出优点是特异性强、灵敏度高、产量高
    D．该试剂放在室温条件下保存即可

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