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    19．利用转基因技术，将环斑病毒复制酶（PRVRP）基因转入木瓜，可获得的高抗优质的转基因木瓜品系．请回答问题：
    （1）PRVRP基因称为目的基因，常用PCR技术对其进行扩增，利用PCR技术扩增时，需要在反应体系中添加的有机物质有引物、模板（目的基因或PRVRP基因）、4种脱氧核苷酸和耐热性的DNA聚合酶，扩增过程可以在PCR扩增仪中完成．
    （2）构建表达载体时，应在目的基因的首端和尾端安插上启动子和终止子，使目的基因能够转录（或表达）．构建好的目的基因表达载体一般通过农杆菌转化法法导入到木瓜细胞中，最终获得转基因植株．
    （3）PRVRP基因的遗传特性能在木瓜植株体内维持和表达的关键是目的基因插入到受体细胞的染色体DNA上（PRVRP基因插入到木瓜细胞的染色体DNA上），这需要通过检测才能知道，检测采用的方法是DNA分子杂交技术．

    分析 基因工程技术的基本步骤：
    1、目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
    2、基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
    3、将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
    4、目的基因的检测与鉴定：
    （1）分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．
    （2）个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

    解答 解：（1）PRVRP基因称为目的基因；利用PCR技术扩增目的基因时，需要的条件有：一对引物、模板（目的基因或PRVRP基因）、4种脱氧核苷酸和耐热性的DNA聚合酶等．
    （2）基因表达载体的组成包括启动子、目的基因、标记基因和终止子，因此构建表达载体时，应在目的基因的首端和尾端安插上启动子和终止子，使目的基因能够转录（或表达）．将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法．
    （3）目的基因（PRVRP基因）的遗传特性能在受体植株体内维持和表达的关键是目的基因插入到受体细胞的染色体DNA上（PRVRP基因插入到木瓜细胞的染色体DNA上）；检测目的基因是否插入受体细胞的染色体DNA上，可采用DNA分子杂交技术．
    故答案为：
    （1）目的基因      引物      模板（目的基因或PRVRP基因）
    （2）启动子    转录（或表达）     农杆菌转化法
    （3）目的基因插入到受体细胞的染色体DNA上（PRVRP基因插入到木瓜细胞的染色体DNA上）     DNA分子杂交技术

    点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作步骤等，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能结合所学的知识准确答题．

    练习册系列答案
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    科目：高中生物 来源： 题型：解答题

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    （1）金黄色葡萄球菌的培养基为7.5%NaCl牛肉膏蛋白胨培养基，根据实验目的应选择固体（填“固体”、“液体”）培养基，培养基中加入7.5%NaCl的作用是利于金黄色葡萄球菌的筛选．
    （2）在制作血平板时需等平板冷却后，方可加入血液，以防止高温破坏血细胞．血平板在使用前，需置于恒温培养箱中适宜温度下培养一段时间的目的是检测血平板是否符合无菌要求．
    （3）取10mL自来水样，加入90mL无菌水稀释成10-1的自来水样，依次操作，制作稀释10-2、10-3、10-4的自来水样．
    （4）将0.1mL 10-l～10-4的四个稀释样液，分别接种到4组（每组3个）血平板上的方法是稀释涂布平板法．在血平板上，金黄色葡萄球菌菌落的周围会出现透明圈（溶血圈）．若在10-3组的3个血平板上，金黄色葡萄球菌菌落数分别为42、38和37，则每升自来水中的活菌数约为3.9×108个．

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    10．近期，《自然》证实基因甲基化缺失是致癌的重要原因，基因甲基化是指在基因调控过程中，基因内部的甲基基团通过酶的作用激活基因，使其表达出相应的蛋白质．若甲基基团缺失，则基因表达出异常的蛋白质，可导致细胞癌变．下列相关说法正确的是（　　）
    A．体细胞内的基因都会发生甲基化
    B．基因表达时以解旋后的任一条链作为转录的模板链
    C．甲基基团缺失导致基因的结构改变
    D．癌细胞内的基因甲基化明显

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    A．贵州矮马和新疆伊犁马种群的基因库存在差异
    B．贵州矮马的DNA甲基化抑制了IGF基因的转录
    C．贵州矮马和新疆伊犁马之间存在生殖隔离
    D．贵州矮马的进化与基因突变、DNA甲基化有关

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    科目：高中生物 来源： 题型：解答题

    14．如图是利用β-乳球蛋白（BLG）基因5′端调控序列和人乳铁蛋白（hLF）基因构建能在羊乳腺细胞特异性表达的运载体的简要流程图，请据图回答下列问题：

    （1）②为PCR过程，除了要加入引物、原料外还需要加入耐高温的DNA聚合酶、模板，在此过程中引物的作用是使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始连接脱氧核苷酸．
    （2）BamH I的识别序列为-G↓GATTC-，Hind III的识别序列为-A↓AGCTT-，选用这两种酶进行操作的意义是避免目的基因和运载体产生的末端任意连接（环化连接），除此之外，③过程还需要DNA连接酶．
    （3）BLG基因5′端调控序列能使hLF基因在羊的乳腺细胞中特异性表达，这是因为BLG基因5′端调控序列作为启动子，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动hLF基因转录出mRNA．
    （4）要获得能表达目的基因的羊，应将重组质粒导入羊的受精卵（填“乳腺细胞”或“去核卵细胞”、“受精卵”），获得优良胚胎后，为了提高胚胎的利用率，常采用胚胎分割的方法来处理胚胎．

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