Question

【题目】2018年！月25日，中科院神经科学研究所研究团队利用类似克隆羊“多莉”的体细胞克隆技术克隆的猕猴“中中”和“华华”，登，上了全球顶尖学术期刊《细胞》的封面，该成果标志着中国率先开启了以体细胞克隆猴作为实验动物模型的新时代。下图是体细胞克隆猴的技术流程图，请据图回答问题。

（1）图中选择猕猴胚胎期而非成年期的成纤维细胞进行培养，其原因是_________。刚放入培养瓶中的细胞沉降到瓶底部后首先会出现___________现象。每一次传代培养时，常利用_________酶消化处理，制成细胞悬液后转入到新的培养瓶中。

（2）图示过程涉及的主要技术有_________（答出三点即可）。以体细胞克隆猴作为实验动物模型的显著优势之一是同-批克隆猴群的遗传背景相同，图中克隆猴的遗传物质主要来自_______。

（3）图中步骤①是克隆猴的技术难点之一，需要将卵母细胞培养到_________后进行去核操作，而后用_________方法激活受体细胞，使其完成分裂和发育。

（4）体细胞克隆猴的另外一个技术难点是猴的体细胞克隆胚胎发育差。科学家发现，胚胎发育障碍与克隆胚胎基因组上大量组蛋白的甲基化密切相关。由此推测，图中Kdm4dmRNA翻译产生的酶的作用是_____。

Answer 1

【答案】胚胎成纤维细胞增殖能力更强，更易于培养 细胞贴壁 胰蛋白 动物细胞核移植技术（或体细胞核移植技术）、早期胚胎培养技术（或动物细胞培养技术）、胚胎移植技术 成纤维细胞的细胞核 减数第二次分裂中期（MⅡ中期） 物理或化学 催化组蛋白的去甲基化

【解析】

1.动物细胞培养过程

取动物胚胎或幼龄动物器官、组织。将材料剪碎，并用胰蛋白酶（或用胶原蛋白酶）处理（消化），形成分散的单个细胞，将处理后的细胞移入培养基中配成一定浓度的细胞悬浮液。悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。当贴壁细胞分裂生长到互相接触时，细胞就会停止分裂增殖，出现接触抑制。此时需要将出现接触抑制的细胞重新使用胰蛋白酶处理。再配成一定浓度的细胞悬浮液。

2.胚胎移植是指将雌性动物的早期胚胎，或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物的体内，使之继续发育为新个体的技术，这是胚胎工程的最后一道工序，胚胎分割时，应选择发育良好、形态正常的桑椹胚或囊胚，对囊胚阶段的胚胎进行分割时要注意将内细胞团均等分割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。

（1）由于胚胎成纤维细胞增殖能力更强，更易于培养，因此在进行核移植时，通常选择胚胎期的成纤维细胞进行培养。动物细胞培养过程中常出现贴壁生长和接触抑制的特点，因此刚放入培养瓶中的细胞沉降到瓶底部后首先会出现细胞贴壁现象。进行传代培养时，常利用胰蛋白酶消化处理，制成细胞悬液后转入到新的培养瓶中。

（2）图示过程涉及的主要技术有动物细胞核移植技术、早期胚胎培养技术（或动物细胞培养技术）、胚胎移植技术。图中克隆猴是成纤维细胞的细胞核移入卵母细胞，获得重组细胞，经过细胞培养获得早期胚胎，然后经过胚胎移植获得的，因此其遗传物质主要来自成纤维细胞的细胞核。

（3）图中步骤①体细胞核移植是克隆猴的技术难点之一，其具体操作为，首先需要将卵母细胞培养到减数第二次分裂中期（MⅡ中期）后进行去核操作，而后用物理或化学方法激活受体细胞，使其完成分裂和发育。

（4）由于胚胎发育障碍与克隆胚胎基因组上大量组蛋白的甲基化密切相关，为了使胚胎顺利发育，需要对组蛋白进行去甲基化操作，因此可推知图中Kdm4dmRNA翻译产生的酶的作用是催化组蛋白去甲基化的。