Question

2007年的诺贝尔生理学或医学奖授予在“基因靶向”技术方面作出突出贡献的三位科学家。“基因靶向”技术，是指应用DNA同源重组原理，通过一定的载体，用设计好的目的基因替代靶基因，从而达到使靶基因功能丧失的目的。借助这一技术，科学家用小鼠进行实验，使其体内的某项特定基因丧失功能，以帮助人们找到治疗疾病的有效方法。下面是该实验的基本过程，请回答有关问题：

(1)获得胚胎干细胞(ES细胞)：实验一般采用ES细胞作为目的基因的受体细胞，这是因为ES细胞具有发育的______________。举出一例获取ES细胞的常用方法：___________________________________________________________________________________________________。

(2)获取目的基因：

①目的基因是靶基因的同源片段，经过修饰使靶基因的功能改变或丧失，就可获得目的基因。

②为了提高实验成功率，需要通过PCR技术获得目的基因的大量拷贝。与体内DNA复制相比，PCR反应体系需加入哪两种特别的物质：_______________________________________________________________和_________________________________。

(3)构建基因表达载体是基因工程的____________，质粒是具有自我复制能力的双链环状DNA，它所具有的一至多个____________________________位点，使目的基因插入其中成为可能，因此常被选作运载体。

(4)将基因表达载体导入ES细胞，从中筛选出成功发生了同源重组的ES细胞，然后培育出小鼠。

①由ES细胞培育出小鼠的过程中，需要采用哪些技术手段？____________________。

②通过检测目的基因是否表达出蛋白质产品，可以确定该小鼠体内是否成功发生了基因的同源重组。请简述这种检测方法。___________________________________________。

 

Answer 1

(1)全能性　从早期胚胎(囊胚内细胞团)中分离(从胎儿的原始性腺中分离：通过核移植技术培育得到)

(2)两种引物　热稳定DNA聚合酶

(3)核心　限制酶切割

(4)①早期胚胎培养技术和胚胎移植技术　②提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原——抗体杂交