Question

11．牛等牲畜的瘤胃中生活着许多以尿素作唯一氮源的微生物．某同学从刚宰杀的牛的瘤胃中取样，获得菌液，并对能分解尿素的细菌进行分离、计数和鉴定．回答下列问题：
（1）为从混杂的菌液中分离菌种，常用平板划线法和稀释涂布平板法方法在固体培养基上接种，使细菌在固体培养基上形成单个菌落，从而获得纯菌株．
（2）为了测定细菌含量，将稀释度为10³与10⁴的菌液均按0．lmL的用量，各接种3个平板，在无氧条件培养一段时间后，10³的稀释度下平板上长出的菌落数分别为45、56、37，而10⁴的稀释度下平板上长出的菌落数分别为26、14、17，则每升菌液的活菌数约为4.6×10⁸个．与活菌的实际数目相比，该方法测得的结果往往偏低，主要原因是两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落．
（3）为了鉴定该菌种，在以尿素为唯一氮源的培养基需添加酚红作指示剂，目的菌在生长过程中会产生脲酶，催化尿素分解并产生NH₃，使pH升高，指示剂变红．

Answer 1

分析 1、微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．
2、统计菌落数目的方法
（1）显微镜直接计数法
 ①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；②方法：用计数板计数； ③缺点：不能区分死菌与活菌．
（2）间接计数法（活菌计数法）
 ①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌．通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌．
②操作
a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性．
b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数．
③计算公式：每克样品中的菌株数=（c÷V）×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数．
3、培养基选择分解尿素的微生物的原理：培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源．缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物．

解答 解：（1）接种微生物常用平板划线法和稀释涂布平板法，使细菌在固体培养基上形成单个菌落，从而获得纯菌株．
（2）采用稀释涂布平板法进行计数时，为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数，因此每升菌液的活菌数约为$\frac{45+56+37}{3}$×10⁷=4.6×10个．与活菌的实际数目相比，该方法测得的结果往往偏低，主要原因是两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落．
（3）为了鉴定该菌种，在以尿素为唯一氮源的培养基需添加酚红作指示剂，目的菌在生长过程中会产生脲酶，催化尿素分解并产生NH₃，使pH升高，指示剂变红．
故答案为：
（1）平板划线法     稀释涂布平板法       菌落
（2）4.6×10⁸个    两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落
（3）酚红       脲

点评 本题考查微生物的分离和培养等知识，对于此类试题，需要考生注意的细节较多，如实验的原理、实验采用的方法、实验现象等，需要考生在平时的学习过程中注意积累．