Question

【题目】2019年7月21日，国内首只商业化克隆猫经代孕猫自然分娩顺利出生。克隆猫大蒜培育的大体过程如图所示，回答下列问题：

（1）受体细胞通常需要培养至____________________________（时期）

（2）图中细胞核供体在培养过程中要用胰蛋白酶处理，这说明细胞间的物质成分为______________，能否用胃蛋白酶代替胰蛋白酶？并说明其原因：________________。

（3）重组细胞在早期胚胎培养液中培养至囊胚期，此时若想获得胚胎干细胞（ES）可以取______________进行培养欲使ES细胞维持不分化状态，需在培养液中添加______________。

（4）若想利用早期胚胎获得更多同种克隆猫可利用________技术，所选代孕猫应满足的条件是_________。

Answer 1

【答案】MⅡ（减数第二次分裂）中期 蛋白质 不能，动物细胞培养的最适pH为7．2~7．4，胃蛋白酶的适宜pH为2，胃蛋白酶在pH为7．2~7．4的动物细胞培养液中无活性 （囊胚）内细胞团 抑制因子 胚胎分割 同种、健康、生理状态相同的其他雌猫

【解析】

1.动物细胞培养时，取幼龄动物的组织，剪碎后，用胰蛋白酶处理分散成单个细胞，制成细胞悬浮液，转入细胞培养液中进行的培养是原代培养；当细胞贴满瓶壁，在用胰蛋白酶处理分散成单个细胞，制成细胞悬浮液，转入培养液中进行的是传代培养。

2.胚胎移植是指将雌性动物的早期胚胎，或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物的体内，使之继续发育为新个体的技术。

3.在体细胞克隆动物的过程中，取动物的体细胞培养，取10代以内的供体细胞的核，从屠宰的母畜体内获取卵母细胞作为受体细胞培养至减数第二次分裂的中期，显微操作去掉卵母细胞的核，然后去核的 卵母细胞与供体细胞的核进行核移植，形成重组细胞，体外培养重组细胞发育形成早起胚胎，然后进行胚胎移植，移植到同种、生理状态相同的雌性动物的体内继续发育，发育成熟后产下的动物即克隆动物，该技术利用了动物细胞核的全能性。

（1）根据以上分析可知，受体细胞卵母细胞培养至减数第二次分裂的中期。

（2）动物细胞培养过程中需要用胰蛋白酶处理，水解细胞间的物质，根据酶的专一性特点可知细胞间的物质为蛋白质，不能用胃蛋白酶替代胰蛋白酶处理，因为动物细胞培养的最适pH为7.2~7.4，胃蛋白酶的适宜pH为2左右，胃蛋白酶在pH为7.2~7.4的动物细胞培养液中失活。

（3）胚胎干细胞的来源有：可以取自囊胚时期的内细胞团的细胞或者取自胎儿的原始性腺，因此若想获得胚胎干细胞（ES）可以取囊胚时期的内细胞团的细胞进行培养，欲使ES细胞维持不分化状态，需在培养液中添加抑制因子。

（4）若想利用早期胚胎获得更多同种克隆猫可利用胚胎分割技术，胚胎移植中所选代孕猫应满足的条件是同种、健康、生理状态相同的其他雌猫。