Question

回答有关基因工程的问题：
（1）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生粘性末端，也可能产生

 

末端．若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生

 

（相同，不同）粘性末端的限制酶．
（2）利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是

 

．在用表达载体转化大肠杆菌时，常用

 

处理大肠杆菌，以利于表达载体进入：为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为

 

．为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成

 

，常用抗原-抗体杂交技术．
如果要将某目的基因通过农杆菌传话法导入植物细胞，先要将目睹基因插入农杆菌Ti质粒的

 

中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的

 

上．

Answer 1

考点：基因工程的原理及技术,基因工程的应用

专题：

分析：基因工程操作的工具是限制性内切酶、DNA连接酶和运载体；基因工程操作的步骤为提取目的基因、目的基因与运载体结合、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与表达．目的基因的检测有多种手段，如①DNA分子杂交技术；②分子杂交技术；③抗原-抗体杂交技术．

解答： 解：（1）用限制酶切割DNA后，可能产生黏性末端，也可能产生平口末端．若要在限制酶基因工程中，往往采用同种限制酶切割目的基因和质粒以产生相同的黏性末端，再用DNA连接酶使其直接进行连接．
（2）RNA聚合酶识别和结合的部位是启动子．将目的基因导入微生物细胞时，常用Ca²⁺处理微生物细胞，使其成为易于吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞，以利于表达载体进入．为了检测目的基因是否转录出了mRNA，可采用分子杂交技术，即用放射性同位素标记的胰岛素基因作探针与mRNA杂交；了检测目的基因转录的mRNA是否翻译成蛋白质，可采抗原--抗体杂交技术．
（3）采用农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞时，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的T-DNA中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的染色体DNA上．
故答案为：
（1）平   相同  
（2）提供RNA聚合酶特异性识别结合位点，驱动基因转录  Ca²⁺DNA-RNA分子杂交  胰岛素原（蛋白质）  
（3）T-DNA   染色体

点评：本题考查基因工程的相关知识，只要考生识记基因工程的工具和操作步骤即可正确答题，属于考纲识记层次的考查，此类试题，需要考生在平时的学习过程中学会构建知识网络结构．