Question

10．限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是-G^↓GATCC-，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是-^↓GATC-．在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点．
（1）请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端．
（2）请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端．
（3）在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来？为什么？
能．因为：因为它们有相同的粘性末端．

Answer 1

分析 关于限制酶，考生可以从以下几方面把握：
（1）来源：主要从原核生物中分离纯化出来．
（2）特异性：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂．
（3）结果：形成黏性末端或平末端．

解答 解：（1）限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是-G^↓GATCC-，因此质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端为：．
（2）限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是-^↓GATC-，因此目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端为：．
（3）限制性内切酶Ⅰ和限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点不同，但两种切割形成的黏性末端相同，因此可在DNA连接酶的作用下连接起来．
故答案为：
（1）
（2）
（3）能    因为它们有相同的粘性末端

点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握基因工程各操作步骤中需要注意的细节问题；识记限制酶的作用特点，能结合限制性内切酶Ⅰ和限制性内切酶Ⅱ的识别序列及切割位点准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查．