Question

8．我国规定1升自来水中大肠杆菌不得超过3个．在培养基中加入伊红美蓝，可以使大肠杆菌的菌落呈深紫色，并带有金属光泽．有关部门据此对自来水中的大肠杆菌进行检测．具体步骤大致如下：
（一）用火焰灼烧自来水龙头3分钟，然后打开水龙头放水5分钟，再用无菌的三角瓶接取1000毫升水样，盖好瓶塞．
（二）将漏斗和抽滤瓶固定好，用镊子夹住滤膜边缘，将水样倒入漏斗中，边抽滤、边加水．
（三）用镊子将滤膜取出、放在无菌平板上进行培养，观察并记录实验结果．
回答下列问题：
（1）实验中所用的醋酸纤维素滤膜、漏斗、抽滤瓶、镊子等实验器材和培养基都需先用高压蒸汽灭菌法进行灭菌．如需检测培养基灭菌是否彻底，常用的方法是将灭菌过的培养基在适宜的条件下培养一段时间，观察培养基上是否有菌落产生．
（2）制作本实验所用的无菌平板时，需要加入碳源和氮源、水、无机盐等大肠杆菌所必需的营养成分，以及加入琼脂，便于统计菌落外；还需要将培养基的pH调整至中性或微碱性．鉴别是否有大肠杆菌菌落，需要在培养基中加入伊红美蓝．
（3）按上述步骤制作的3个样品平板上所有的菌落数分别为49、51、47．能否据此得出每升水样中大肠杆菌数约为49的结论？不能．理由是培养基表面生长的菌落，只有部分是大肠杆菌的菌落．

Answer 1

分析 1、实验室常用的消毒方法：煮沸消毒、化学药物消毒；紫外线消毒．
2、实验室常用的灭菌方法：灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌．
3、微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求．对异养微生物来说，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作为营养要素成分时并不是起单一方面的作用．

解答 解：（1）培养基常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌．检测培养基灭菌是否彻底，可以设置空白对照，即将灭菌过的培养基在适宜的条件下培养一段时间，观察培养基上是否有菌落产生．
（2）培养微生物的培养基需要碳源、氮源、水和无机盐．统计微生物数目一般用稀释涂布平板法，该培养基属于固定培养基，因此培养基需要加入琼脂．大肠杆菌生长的最适合pH为中性或微碱性，伊红美蓝是专一鉴定大肠杆菌的指示剂，利用伊红美兰培养基可以鉴定大肠杆菌．
（3）该培养基是鉴别培养基，在平板上生长的菌落，只有部分是大肠杆菌形成的菌落，因此大肠杆菌数实际数值应该小于49．
故答案为：
（1）高压蒸汽灭菌  将灭菌过的培养基在适宜的条件下培养一段时间，观察培养基上是否有菌落产生  
（2）碳源和氮源  琼脂  中性或微碱  伊红美蓝  
（3）不能  培养基表面生长的菌落，只有部分是大肠杆菌的菌落

点评 本题考查了微生物分离与培养的有关知识，要求考生能够识记灭菌和消毒的方法，掌握空白对照组的设置方法，识记培养基中类型，识记鉴别大肠杆菌的实验原理和方法，再结合所学知识准确答题．