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13.如图是对Ⅰ型糖尿病大鼠进行基因治疗的示意图,据图回答:

【注:Proinsulin DNA(胰岛素原基因);PCMV(某种质粒);kanr(卡那霉素抗性基因);EcoRⅠ、ClaⅠ、HindⅢ(限制性核酸内切酶)】
(1)总RNA来自于胰腺细胞 (填“胰腺细胞”或“骨骼肌细胞”),过程②是利用PCR技术从cDNA文库中扩增出大量的Proinsulin DNA.该技术的前提是需要根据所需片段的一段核苷酸序列合成引物.
(2)过程③需要用EcoRI、HindⅢ、DNA连接酶酶构建出PCMV/Proinsulin DNA重组质粒,再将该重组质粒转化到处于感受态的细菌中,培养基加入卡那霉素的目的是筛选出含有重组质粒的细菌.
(3)为探明Proinsulin DNA在治疗中的作用,除需要以不作处理的Ⅰ型糖尿病大鼠作为对照组之外,还需设置注射了同等剂量PCMV的Ⅰ型糖尿病大鼠作为对照,通过比较实验组和对照组血液中血糖浓度(或胰岛素浓度)来评估该基因治疗的效果.

分析 分析题图:图中①为逆转录过程,②是用限制酶切割获取目的基因的过程,③是基因表达载体的构建过程,之后再将目的基因导入受体细胞,最后进行筛选和鉴定.

解答 解:(1)胰岛素基因只在胰腺中的胰岛B细胞中才表达,因此总RNA来自于胰腺细胞;利用PCR技术可以在体外大量扩增目的基因,该技术的前提是需要根据所需片段的一段核苷酸序列合成引物.
(2)目的基因两侧分别是限制酶EcoRI、HindⅢ的酶切位点,因此切割含有目的基因的外源DNA分子和运载体需要这两种限制酶,其次还需要DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组质粒;将目的基因导入微生物细胞常用感受态转化法,即用钙离子处理微生物细胞,使之成为感受态;培养基加入卡那霉素的目的是筛选出含有重组质粒的细菌.
(3)为探明Proinsulin DNA在治疗中的作用,除需要以不作处理的Ⅰ型糖尿病大鼠作为对照组之外,还需设置注射了同等剂量 PCMV的Ⅰ型糖尿病大鼠作为对照,通过比较实验组和对照组血液中血糖浓度(或胰岛素浓度)来评估该基因治疗的效果.
故答案为:
(1)胰腺细胞     PCR       引物
(2)EcoRI、HindⅢ、DNA连接酶      感受态    筛选出含有重组质粒的细菌
(3)PCMV      血糖浓度(或胰岛素浓度)

点评 本题结合图解,考查基因工程的相关知识,要求考生识记基因工程的原理、操作步骤,掌握各操作步骤中需要注意的细节,能结合图中信息准确答题.

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