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    16．某研究所利用基因工程、胚胎工程等技术获得能产生人凝血因子的转基因山羊．回答下列问题：
    （1）基因工程的基本操作流程中，当获取目的基因后，在将其中导入受体细胞前需要进行一个重要的操作步骤，即构建（基因）表达载体，该步骤使用的两种工具酶分别是限制酶、DNA连接酶．
    （2）从公羊体内采集的精子需经过获能处理，才能在体外与卵细胞结合形成受精卵．常用显微注射法将目的基因导入受精卵中，受精卵在体外培养至桑椹胚（或囊胚）阶段时再移植到母羊子宫中．
    （3）利用分子杂交技术可检测转基因山羊细胞中的人凝血因子是否转录出了mRNA（填“tRNA”、“mRNA”或“rRNA”）；利用针对人凝血因子的抗体进行抗原-抗体杂交，可检测目的基因是否翻译．

    分析 基因工程技术的基本步骤：
    （1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
    （2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
    （3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
    （4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

    解答 解：（1）基因工程的基本操作步骤主要包括四步：①目的基因的获取；②基因表达载体的构建；③将目的基因导入受体细胞；④目的基因的检测与表达．构建基因表达载体的步骤中，首先需要限制酶切割外源DNA分子和运载体，其次还需要DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组DNA分子．
    （2）精子需要经过获能处理才能参与受精；将目的基因导入动物细胞常用显微注射法；胚胎移植时，应该选择发育到桑椹胚或囊胚阶段的胚胎．
    （3）利用分子杂交技术可检测转基因山羊细胞中的人凝血因子是否转录出了mRNA；检测目的基因是否翻译，可利用针对人凝血因子的抗体进行抗原-抗体杂交．
    故答案为：
    （1）（基因）表达载体   限制酶、DNA连接酶
    （2）获能       显微注射       桑椹胚（或囊胚）
    （3）mRNA       人凝血因子

    点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作工具及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节问题，能结合所学的知识准确答题．

    练习册系列答案
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    A．红细胞从血浆中吸收K+
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    A．12356•789B．125436•789C．1233456•789D．12345456•789

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    D．达尔文用金丝雀虉草作实验，证明胚芽鞘尖端的某种“影响”与向光性有关

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