Question

20．人和哺乳动物的尿中含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染．土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源．现对土壤中的这类细菌进行分离实验，请回答下列问题：
（1）分离培养细菌时必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无菌的，培养基常用的灭菌方法有高压蒸汽灭菌．
（2）将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培养．在稀释土壤溶液的过程 每一步都要在酒精灯火焰旁旁进行操作．接种后的培养皿倒置于37℃的恒温培养箱中培养．
（3）用含有酚红指示剂的培养基筛选能分泌脲酶的细菌，从功能上划分该培养基属于选择  培养基．若培养基中存在有分解尿素的细菌，其菌落周围会出现红色环带，这是由于尿素被分解产生的氨使pH升高，酚红指示剂产生的颜色变化，从而证明这一菌株可以尿素为氮源．变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力越强．
（4）与全营养培养基中的菌落相比，以尿素为氮源的培养基中菌落数B．
A．多        B．少        C．相等        D．几乎为零．

Answer 1

分析 （1）培养基的营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐．分为液体培养基和固体培养基．
（2）常用灭菌方法：灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌法．
（3）培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌和消毒方法依次：高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌、化学消毒、紫外线灭菌、巴氏消毒法．
（4）选择培养基的原理是：不同微生物在代谢过程中所需要的营养物质和环境不同．有的适于酸性环境，有的适于碱性环境；例如从土壤中分离放线菌时，可在培养基中加入10%的酚数滴，抑制细菌和真菌的生长；如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素；培养金黄色葡萄球菌，可在培养基中加入高浓度的食盐．

解答 解：（1）常用的灭菌方法有高压蒸汽灭菌，灼烧灭菌，干热灭菌．其中培养基常用的灭菌方法为高压蒸汽灭菌．
（2）为避免杂菌污染，操作要在酒精灯火焰旁操作，为防止水蒸气在皿盖上凝结会产生水滴，在恒温培养箱中培养皿需要倒置培养．
（3）用含有酚红指示剂的培养基筛选能分泌脲酶的细菌，从功能上划分该培养基属于选择 培养基．尿素被分解成氨可使PH呈碱性，变色区域越大，说明分解能力越强；以尿素为氮源的培养基中菌落数少，因为其他微生物不能在该环境中生存．
（4）以尿素为氮源的培养基中菌落数少，因为其他微生物不能在该环境中生存．
故答案为：
（1）高压蒸汽灭菌
（2）酒精灯火焰旁     倒置      恒温培养箱
（3）选择      氨     越强       
（4）B

点评 本题主要考查尿素分解菌的分离及微生物的灭菌方法等知识点，意在加强学生实验的无菌操作意识，提高实验技能．