Question

【题目】科研人员通过体细胞杂交培育食用菌新品种。

（1）科研人员分别测定了杏鲍菇（A）和秀珍菇（B）单核菌株、双核菌株的生长速度和原生质体产量，结果如下表。

菌株	生长速度 （cm/d）	原生质体产量 （107个/mL）	菌株	生长速度 （cm/d）	原生质体产量 （107个/mL）
单核菌株A1	0.28	0.6	单核菌株B1	0.23	3.0
单核菌株A2	0.22	1.5	单核菌株B2	0.31	0.9
双核菌株A1	0.85	1.8	双核菌株B1	0.80	0.3
双核菌株A2	0.71	2.2	双核菌株B2	0.61	0.3

研究人员最终选择双核菌株A1和单核菌株B1作为亲本进行细胞融合，选择的理由是______________。

（2）利用酶解法去除细胞壁时，应严格控制酶的_________等条件，以提高原生质体产量并降低破损率。

（3）科研人员将双核菌株A1的原生质体进行高温灭活，使其仅能生存而无法繁殖。将灭活后的双核菌株A1与未灭活的单核菌株B1的原生质体用_________试剂诱导融合。融合过程需要在_________的缓冲溶液中进行，以防止原生质体破裂。

（4）科研人员将融合剂处理后的原生质体悬液涂布于培养基上进行筛选。

①菌种遗传背景的差异会导致菌丝之间出现相互排斥，能够在培养基上观察到一条拮抗带。挑取_________两侧的一对菌株进行进一步筛选。

②研究发现，双核菌丝在进行细胞分裂时，会形成一个喙状结构，称为锁状联合，而单核菌丝不出现。单核菌株B1与灭活的双核菌株A1形成的融合子能够出现双核化，也可观察到锁状联合。科研人员进行显微镜观察并从中选择_________的一对菌株，进行下一步筛选。

③最终筛选出杂合菌株的方法是_________。

Answer 1

【答案】 双核菌株A1生长速度快，单核菌株B1原生质体产量高 浓度和处理时间 PEG 等渗 拮抗带 （拮抗带）两侧菌株均有锁状联合 将上述有锁状联合的菌种分别与B1培养在同一培养基上，若出现拮抗带则该菌种为杂合菌株

【解析】试题分析：根据表格分析，杏鲍菇中双核菌株A1的生长速度最高，双核菌株A2的原生质体产量最高；秀珍菇中双核菌株B1的生长速度最高，单核菌株B1的原生质体产量最高；在两种真菌中，双核菌株A1生长速度快，单核菌株B1原生质体产量高。

（1）根据以上分析，双核菌株A1生长速度快，单核菌株B1原生质体产量高，因此研究人员最终选择双核菌株A1和单核菌株B1作为亲本进行细胞融合。

（2）利用酶解法去除细胞壁时，应严格控制酶的浓度和处理时间等条件，以提高原生质体产量并降低破损率。

（3）将灭活后的双核菌株A1与未灭活的单核菌株B1的原生质体用PEG试剂诱导融合。融合过程需要在等渗的缓冲溶液中进行，以防止原生质体破裂。

（4）①根据题意，在培养基上观察到一条拮抗带，挑取拮抗带两侧的一对菌株进行进一步筛选。

②根据题意，科研人员进行显微镜观察并从中选择两侧菌株均有锁状联合的一对菌株，进行下一步筛选。

③最终筛选出杂合菌株的方法是将上述有锁状联合的菌种分别与B1培养在同一培养基上，若出现拮抗带则该菌种为杂合菌株。