Question

12．将醋酸菌突变体中与耐酸有关的ALDH基因导入优良醋酸菌中，选育出高发酵速率、耐酸的醋酸菌，用于果醋生产．
请分析回答下列问题：

（1）对含有ALDH基因的DNA与质粒用同种限制酶切割后，通过DNA连接 酶连接形成重组质粒． 为获得耐酸的醋酸菌，用平板划线（稀释涂布平板） 法接种于含高浓度醋酸的培养基进行筛选．将筛选甘油管藏 纯化的菌种用 的方法长期保存．
（2）图1表示温度尧乙醇浓度对该醋酸菌产酸量的影响．
①醋酸菌能将乙醇转变为乙醛，再将其转变为醋酸．
②研究不同酒精浓度下的最高产酸量时，最好把温度控制为35（30-35）℃，如温度过高，醋酸菌代谢缓慢甚至死亡，原因是温度过高，影响酶的活性（使酶失活）．
③酒精发酵后通过出料口检测酒精浓度，将发酵液中酒精浓度调节到4% 左右？ 才接种醋酸菌，较高的酒精浓度会使产酸量下降，不适宜接种，原因是（较）高浓度的酒精会抑制醋酸菌的生长和代谢．
（3）为检测发酵过程中醋酸菌数量，将1mL发酵液稀释100倍后，分别取0.1mL稀释菌液均匀 涂布在4个平板上曰经适当培养后，4个平板上的菌落数分别为24、139、140、141，据此可得出每毫升发酵液中的活菌数为1.4×10⁵个/mL．

Answer 1

分析 本题是运用基因工程技术选育选育出高发酵速率、耐酸的醋酸菌，用于果醋生产．据图分析：图1中醋酸菌的最适发酵温度是35℃，图2中乙醇浓度为4%时醋酸菌的产酸量最高．据此分析作答．

解答 解：（1）用基因工程选育醋酸菌时，对含有ALDH基因的DNA与质粒用同种限制酶切割后，通过基因针线即DNA连接酶形成重组质粒．常用平板划线法或稀释涂布平板法接种并筛选耐酸的醋酸菌．用甘油管藏法将纯化的菌种长期保存．
（2）①醋酸菌能进行有氧发酵将乙醇转变为乙醛，在氧化为醋酸．
②图1中醋酸菌的最适发酵温度是35℃，所以最好把温度控制为35（30-35）℃．如温度过高，影响酶的活性，导致醋酸菌代谢缓慢甚至死亡．
③图2中乙醇浓度为4%时醋酸菌的产酸量最高，所以解析果醋发酵时需要将发酵液中酒精浓度调节到4%左右才接种醋酸菌．否则高浓度的酒精会抑制醋酸菌的生长和代谢，导致产酸量下降．
（3）进行菌落计数时需要选择每个平板菌落数在30～300之间的平板进行统计计数，为避免误差，应当选择3个或三个以上的平板进行计数并去平均值，故
每毫升发酵液中的活菌数为（139+140+141）÷3÷0.1×100=1.4×10⁵个/mL．
故答案为：
（1）DNA 连接        平板划线（稀释涂布平板）      甘油管藏
（2）①乙醛         
②35（30-35）温度过高，影响酶的活性（使酶失活）   
③4%          （较）高浓度的酒精会抑制醋酸菌的生长和代谢
（3）1.4×10⁵

点评 本题以醋酸菌的筛选为背景主要考查微生物的筛选、培养与计数的相关知识，意在强化学生对相关知识的理解与运用，题目难度中等．