Question

13．为分离土壤中分解纤维素的微生物，某同学设计了以下两种培养基配方：

甲培养基配方
NaNO3	1g
Na2HPO4﹒7H2O	1.2g
KH2PO4	0.9g
MgSO4﹒7H2O	0.5g
KCl	0.5g
酵母膏	0.5g
水解酪素	0.5g

乙培养基配方
CMC-Na	5～10g
酵母膏	1g
KH2PO4	0.25g
琼脂	15g
土豆汁	100mL

请回答以下问题：
（1）制备培养基时需采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，上述两种培养基中，乙培养基是固体培养基．
（2）土壤中分解纤维素的微生物数量较少，为提高其浓度，可以初步选择培养，确保能分离出目的微生物．若采用甲培养基进行初步选择，则需要再添加一定量纤维素，理由是以纤维素作为唯一碳源，抑制其他杂菌生长．
（3）经初步选择后，在甲培养基中含有目的微生物，但无法分离，因为在甲培养基中无法形成目的微生物的单个菌落．
（4）为分离出目的微生物，可以采用稀释涂布平板法，将初步选择得到的微生物进行一系列的梯度稀释后，接种到乙培养基上．培养一段时间后，再倒入并覆盖一定浓度的刚果红（或CR）染料，观察是否出现透明圈及菌落形态，鉴定并获得目的微生物．

Answer 1

分析 分离纤维素分解菌的实验流程是：土壤取样→选择培养→梯度稀释→将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选产生透明圈的菌落．
培养基的成分主要包括：水、无机盐、碳源、氮源．
选择培养基是指通过培养混合的微生物，仅得到或筛选出所需要的微生物，其他不需要的种类在这种培养基上是不能生存的．刚果红染液可以与纤维素结合呈红色，纤维素酶可以分解纤维素，不能与刚果红反应呈红色．

解答 解：（1）制备培养基时需采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌．上述两种培养基中，乙培养基配方中加入了琼脂作为凝固剂，因此属于固体培养基．
（2）筛选纤维素分解菌时需要使用以纤维素为唯一碳源的选择培养基，这种培养基能抑制其他杂菌生长，因此若采用甲培养基进行初步选择，则需要再添加一定量纤维素．
（3）如果培养基中没有形成微生物的单个菌落，则在培养基中的目的微生物将无法分离．
（4）为分离出目的微生物，可以采用稀释涂布平板法，将初步选择得到的微生物进行一系列的梯度稀释后，接种到乙培养基上．培养一段时间后，再倒入并覆盖一定浓度的刚果红（或CR）染料，观察是否出现透明圈及菌落形态，鉴定并获得目的微生物．
故答案为：
（1）高压蒸汽灭菌    乙
（2）纤维素        以纤维素作为唯一碳源，抑制其他杂菌生长
（3）单个菌落
（4）稀释涂布平板      刚果红（或CR）

点评 本题主要考查微生物培养基的制作和目的微生物的筛选与分离，意在强化学生对相关知识点的识记与理解．