[题目]回答下列有关微生物的问题.苯酚(C6H5OH)是广泛存在于化工行业废水中的一种污染物.为了分离和纯化高效分解苯酚的细菌.科研人员进行了下图所示的相关试验.(实验中的LB培养基能使菌种成倍增加)(1)该实验需要用到的实验仪器有:锥形瓶.培养皿. (写出2种即可.但必须是微生物培养专用).(2)理论上.步骤②中的LB培养基含有的营养物质除了� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

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【题目】回答下列有关微生物的问题。

苯酚（C6H5OH）是广泛存在于化工行业废水中的一种污染物。为了分离和纯化高效分解苯酚的细菌。科研人员进行了下图所示的相关试验。（实验中的LB培养基能使菌种成倍增加）

（1）该实验需要用到的实验仪器有：锥形瓶、培养皿、_________________（写出2种即可，但必须是微生物培养专用）。

（2）理论上，步骤②中的LB培养基含有的营养物质除了碳源外，还有__________等。

A. 氮源 B. 激素 C. 酶 D. 生长因子 E.伊红美蓝

（3）步骤③培养基成分中的苯酚作为细菌培养唯一的____________；步骤③和④中的培养基最主要的成分差异是后者添加了____________。步骤②、③、④的培养基必须经过灭菌，其具体要求是____________。

（4）经步骤④培养后的菌落如图，则接种时甲、乙、丙三个区域的操作顺序是____________。多次划线后，最终可以得到由一个细胞繁殖而来的____________。

（5）步骤④的目的是____________；经过步骤⑤培养后，应该从残余苯酚浓度___________的培养瓶中再分离、再培养目的菌株。

【答案】高压灭菌锅、超净工作台、接种环（针） A、D 碳源琼脂 121℃，1.05kg/cm2，15~30分钟甲--乙--丙单个菌落分离纯化最低

【解析】

从土壤中分离微生物的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株；微生物的营养物质有5类，分别是水、无机盐、碳源、氮源及特殊生长因子；筛选菌株的过程要使用选择培养基，操作过程中要注意无菌操作；常用的固体培养基上接种方法主要有平板划线法和稀释涂布平板法，微生物计数可用稀释涂布平板法和血球计数板计数法；灭菌的方法主要有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌。

（1）微生物分离实验的过程中常用的仪器有锥形瓶、培养皿、高压灭菌锅、超净工作台、接种环（针）等。

（2）步骤②中的LB培养基中必须添加的微生物的营养物质有5类，分别是水、无机盐、碳源、氮源及特殊生长因子，故选AD。

（3）该实验中，苯酚作为细菌培养唯一的碳源；步骤③和④中的培养基分别是液体培养基和固体培养基，因此两者最主要的成分差异是后者添加了琼脂；步骤②、③、④的培养基需用高压蒸汽灭菌，其具体要求是121℃，1.05kg/cm2，15～30分钟。

（4）利用平板划线法接种时，随着划线次数的增加，细菌数目逐渐减少，因此图中划线顺序应为甲→乙→丙，最终可以得到由一个细胞繁殖而来的单个菌落。
（5）步骤④的目的是分离纯化；经过步骤⑤培养后，应该从残余苯酚浓度最低的培养瓶中再分离、再培养目的菌株。

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实验材料：肝部长有肿瘤的小鼠，二氯二乙胺溶液，蒸馏水，生理盐水，含有全部营养物质的细胞培养液，显微镜，细胞计数板，试管，吸管等。

（1）下面为一学生设计的实验内容，请根据科学探究要求把实验设计补充完整。实验操作如下：

①取洁净的培养皿一个，加入适量的培养液；从小鼠肝部切取肿瘤组织并将其剪碎，利用_____酶液处理，使细胞分散开，置于培养皿中培养。

②__________________________________。

③从培养皿中吸取等量的培养液置于各试管中，振荡后，在适宜温度下培养一段时间。

④从摇匀的各支试管中吸取适量的培养液置于细胞计数板内，在低倍显微镜下观察计数板三次，记录数据如下。

实验组别		1	2	3	4	5
二氯二乙胺浓度(mg/mL)		0.1	0.2	0.3	0.4	0
细胞数目（个/mL）	计数板1	318	271	181	89	561
	计数板2	319	272	183	93	563
	计数板3	323	267	176	88	556
处理方法：____________________		___	____	____	___	____