Question

绿色荧光蛋白GFP能在蓝光或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：

（1）若限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G^↓GATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—^↓GATC—，在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点，在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来__________，理由是： ___________________________________________。

（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多的方法是______________________。

（3）获得转基因猪的关键步骤是_____（填序号），GFP基因的作用是作为_______。抑制小猪抗原表达的基因要插入到启动子和_________之间。获得的转基因克隆猪，可以解决的医学难题是可以避免     _____________________。

（4）目前科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白，黄色荧光蛋白等，采用蛋白质工程技术制造出蓝色荧光蛋白过程的正确顺序是：_____________________（用数字表示）。

①推测蓝色荧光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸

②蓝色荧光蛋白的功能分析和结构设计序列

③蓝色荧光蛋白基因的修饰（合成）  

④表达出蓝色荧光蛋白。

Answer 1

（1）可以连接(1分) 因为由两种不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的（或是可以互补的）

（2）显微注射技术

（3）②     作为标记基因     终止子      器官移植时发生免疫排斥反应

（4）②①③④