Question

为探究SHH基因与角化囊肿发生的相关性，科研人员利用SHH基因的非模板链转录合成RNA作为探针，进行分子杂交实验，以检测SHHH基因在角化囊肿中的表达情况。其基本流程如下图：（Amp表示氨苄青霉素抗性基因；LacZ基因被SHH基因插入后不表达）

请回答：
（1）重组载体中SHH基因转录合成RNA探针时，       （需要/不需要）启动子。
（2）步骤②中，用Ca²⁺处理大肠杆菌，使之成为        细胞，然后导入重组载体。实验中，用添加氨苄青霉素的培养基培养大肠杆菌，未导入质粒的细菌将会死亡，原因是这此细菌不含有       基因。
（3）能表达LacZ基因的大肠杆菌在含有IPTG和X－gal的培养基上会形成蓝色菌落，易于识别。根据上述原理可以初步判断       （蓝色/白色）菌落中的大肠杆菌为重组菌。
（4）将制备的探针加入角化囊肿切片中，探针将与        形成杂交带，进而判断SHH基因的转录情况。

Answer 1

（1）需要  （2）感受态    Amp（或氨苄青霉素抗性或抗性）
（3）白色   （4）SHH转录的mRNA（只写mRNA不给分）

解析试题分析：（1）由图可知，SHH基因插入在LacZ基因中，LacZ基因被SHH基因插入后不表达，所以要使SHH基因表达就需要启动子，启动子是RNA聚合酶识别结合的位置，RNA聚合酶结合到启动子才能转录。
（2）大肠杆菌细胞用Ca²⁺处理后就称为感受态细胞；要在添加氨苄青霉素的培养基上生存，一定要含有抗氨苄青霉素基因才可以，没有抗氨苄青霉素基因将会死亡。
（3）能表达LacZ基因的大肠杆菌在含有IPTG和X－gal的培养基上会形成蓝色菌落，重组菌中LacZ基因被SHH基因插入后不表达，含有IPTG和X－gal的培养基上会形成白色菌落。
（4）判断SHH基因的转录情况，也就是判断SHH基因是否转录出mRNA。
考点：本题考查基因工程，意在考查考生能理解所学知识的要点。