低温蛋白酶是海洋嗜冷细菌分泌的酶类.最适温度在20℃左右.作为洗衣粉添加剂可在较低的温度下达到理想的洗涤效果．如图为分离可分泌低温蛋白酶的某种嗜冷菌的操作步骤据图回答问题:(1)分装前.对培养基要进行操作．为避免杂菌污染.要及时进行操作．(2)将扩大培养后的深海微生物用法接种到含酪蛋白的固体培养基表面.在适宜条件下培养一段时间.挑出� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

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低温蛋白酶是海洋嗜冷细菌分泌的酶类，最适温度在20℃左右，作为洗衣粉添加剂可在较低的温度下达到理想的洗涤效果．如图为分离可分泌低温蛋白酶的某种嗜冷菌的操作步骤据图回答问题：
（1）分装前，对培养基要进行

操作．为避免杂菌污染，要及时进行

操作．
（2）将扩大培养后的深海微生物用

法接种到含酪蛋白的固体培养基表面，在适宜条件下培养一段时间，挑出形成透明圈的单一菌落，即为初选出的嗜冷菌．从嗜冷菌分泌的蛋白质中分离出低温蛋白酶的最常用的方法是

．
（3）为进一步检测分离出的嗜冷蛋白酶的最适温度，将该菌按上图所示分5组分别置于

中进行培养，

组所对应的温度为最适温度．
（4）为提高酶的利用率，可以采用

技术，常用的方法有

．

考点：制备和应用固相化酶

专题：

分析：灭菌是指利用强烈的理化因素杀灭物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子；高温杀菌可以破坏蛋白质、核酸等高分子化合物的活性，可分为灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌．细菌培养过程中接种针、接种环等金属用具采用火焰灼烧灭菌，培养基进行高压蒸气灭菌，玻璃器皿进行干热灭菌；高压蒸汽灭菌锅是灭菌的一个设备，一般压力在100KPa，温度在121℃的条件下，维持15-30分钟用于培养基的灭菌．
稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基表面，进行培养；在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落．平板划线法通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面；在数次划线后培养，可以分离由一个细菌繁殖而来的肉眼可见的子细胞群，这就是菌落．
固定化技术包括包埋法、物理吸附法和化学结合法（交联法），由于细胞相对于酶来说更大，难以被吸附或结合，因此多采用包埋法；而酶小，容易从包埋的材料漏出，则采用物理吸附法或化学结合法．

解答： 解（1）培养基在分装之前要先调试pH，然后分装，再灭菌，对培养基进行灭菌常用的方法是高压蒸汽灭菌法．
（2）培养分离微生物时常用稀释涂布平板法或平板划线法；而分离不同种类蛋白质时常用电泳法．
（3）培养的过程需放在恒温箱内进行培养；因为是最适温度下的，透明圈与菌落直径比值最大．
（4）可通过固定化酶来提高酶的利用率，固定化常用的方法是共价键结合法或物理吸附法．
故答案为：（1）调pH   高压蒸汽灭菌
（2）稀释涂布平板（或平板划线）  电泳法
（3）恒温箱透明圈与菌落直径比值最大
（4）固定化    共价键结合法（或物理吸附法或包埋法）

点评：本题考查微生物的培养和分离、及固定化酶制备等的相关知识，意在考查考生理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力．

练习册系列答案

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．
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等必需的营养成分，并在含5%CO₂的无菌、恒温培养箱中进行，CO₂的作用是

．
（4）定向诱导使重组细胞B发生

，从而形成功能专一的胰岛样细胞．为检测胰岛样细胞是否具有胰岛B细胞的正常生理功能，研究人员分别分别在甲、乙两组培养液中加入不同浓度的葡萄糖溶液，将胰岛样细胞分别放在甲、乙两组培养液中，保温相同时间后检测胰岛素的分泌量．若诱导成功，则图2中甲组应为

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．

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（1）阁甲中a、b两个生理过程发生的场所是

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．
（2）图甲中物质D为

，D的生成呈可代表光合作用的强度．除此外，下列哪些选项也能够代表光合作用强度？

．
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（3）经研究发现，该植物夜晚虽然能吸收CO₂，却不能合成D，原因是

．
（4）在电子显微镜下观察，可肴到叶绿体内部有一些颗粒，它们被肴作是叶绿体的脂质仓库，其体积随叶绿体的生长而逐渐变小，可能的原因是

．
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；
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．
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．
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