[题目]类产碱假单胞菌杀虫蛋白不易被蝗虫体内蛋白酶降解.是一种安全的细菌杀虫蛋白.某研究小组将类产碱假单胞菌杀虫蛋白基因(ppip)导入牧草中获得了抗蝗虫牧草品种.(1)ppip基因.还有一些抗病基因.抗除草剂基因等都是用来提高植物的能力.该研究小组检查基因工程是否做成功的一步是 .其中目的基因能否在受体细胞中稳定遗� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

【题目】类产碱假单胞菌杀虫蛋白不易被蝗虫体内蛋白酶降解，是一种安全的细菌杀虫蛋白。某研究小组将类产碱假单胞菌杀虫蛋白基因（ppip）导入牧草中获得了抗蝗虫牧草品种。

（1）ppip基因，还有一些抗病基因，抗除草剂基因等都是用来提高植物的_______能力。该研究小组检查基因工程是否做成功的一步是_______________，其中目的基因能否在受体细胞中稳定遗传的关键是________。

（2）下图是该研究小组设计的 T-DNA 元件示意图。

①携带ppip的T-DNA 导入植物细胞的方法是_____________；T-DNA 发挥的功能是_____________________。

②将被检材料用含有底物（X-Gluc）的缓冲液浸泡，若组织细胞表达出GUS，该酶就可将X-Gluc水解生成蓝色产物，从而使被检材料显蓝色。如下图所示。

研究发现天然植物体内无GUS，根据T-DNA元件示意图，请思考gus基因（β-葡萄糖苷酸酶基因）在植物基因表达载体中作为___________；选取该基因的原理是____________________。

【答案】抗逆目的基因的检测与鉴定检测转基因生物DNA上是否插入了目的基因农杆菌转化法将携带的ppip转移至受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上标记基因天然植物体内无GUS，不能催化X-Gluc产生蓝色产物；若目的基因成功导入受体细胞，与其相连的标记基因表达的GUS可催化X-Gluc产生蓝色产物。因此可以通过有无蓝色产物来鉴定目的基因是否导入受体细胞。

【解析】

基因工程的基本操作程序

第一步：目的基因的获取：原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成，人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。

第二步：基因表达载体的构建

第三步：将目的基因导入受体细胞，常用的转化方法：

将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是农杆菌转化法，其次还有基因枪法和花粉管通道法等；

将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是显微注射技术。

第四步：目的基因的检测和表达。

（1）ppip是一种杀虫蛋白，使植株具有抗虫的特性，和抗病基因，抗除草剂基因等都是用来提高植物的抗逆能力；基因工程是否成功的第一步是目的基因的检测与鉴定；目的基因在受体细胞中稳定遗传的关键是检测转基因生物DNA上是否插入了目的基因。

（2）①将目的基因导入植物细胞的方法通常是农杆菌转化法，T-DNA将携带的ppip转移至受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上

②由于GUS可以将X-Gluc水解生成蓝色产物，所以gus基因在运载体中作为标记基因，其原因天然植物体内无GUS，不能催化X-Gluc产生蓝色产物；若目的基因成功导入受体细胞，与其相连的标记基因表达的GUS可催化X-Gluc产生蓝色产物。因此可以通过有无蓝色产物来鉴定目的基因是否导入受体细胞。

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【题目】有机物M是有机合成的重要中间体，制备M的一种合成路线如图（部分反应条件和试剂略去）：

已知：①A分子的核磁共振氢谱中有3组峰；

②（NH2容易被氧化）

③已知(CH3CO)2O的结构为：

④RCH2COOH

请回答下列问题：

（1）E中官能团的名称_________，C的化学名称为__________。

（2）F的结构简式为__________。

（3）A→B的化学方程式为______________。

（4）化合物H可以发生的反应有_____（填选项字母）。

a.加成反应 b.氧化反应 c.取代反应 d.消去反应

（5）满足下列条件的M的同分异构体有________种（不考虑立体异构）。

①能与FeCl3溶液发生显色反应

②能与NaHCO3反应

③含有-NHCOCH3

④苯环上仅有二个或者三个取代基

（6）参照上述合成路线，以为原料(无机试剂任选)，设计制备的合成路线：_________。

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（2）取小鼠M的脾脏细胞制备成细胞悬液，与实验用骨髓瘤细胞进行融合，用选择培养基筛选得到具有________能力的细胞。核苷酸合成有两个途径，物质A可以阻断其中的全合成途径（如下图）。正常细胞内含有补救合成途径所必需的转化酶和激酶，制备单克隆抗体时选用的骨髓瘤细胞中缺乏转化酶。可用加入H、A、T三种物质的“HAT培养基”筛选特定的杂交瘤细胞。

融合前将部分培养细胞置于含HAT的选择培养基中培养，一段时间后培养基中________（有/无）骨髓瘤细胞生长，说明培养基符合实验要求。杂交瘤细胞可以在HAT培养基上大量繁殖的原因是________________。

（3）将获得的上述细胞在多孔培养板上培养，用ICAM-1检测，从中选择________的杂交瘤细胞，植入小鼠腹腔中克隆培养，一段时间后从小鼠腹水中提取实验用抗体。

（4）若进一步比较实验用抗体和131I对GD模型小鼠的治疗作用，可将若干GD模型小鼠等分为三组，请补充下表中的实验设计。

对照组（A）	131I治疗组（B）	单克隆抗体治疗组（C）
给GD模型小鼠腹腔注射0．1mL无菌生理盐水	给GD模型小鼠腹腔注射溶于0．1mL无菌生理盐水的131I	________

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（1）与步骤②相比，步骤③的培养基成分还含有__________、___________。两培养基均以木糖作为唯一碳源的目的是___________。

（2）步骤③中，应在_____________附近倒平板，不采用涂布平板接种的原因是___________________________________________________________。平板在适宜条件下培养一段时间后，筛选有透明圈的菌落作为候选菌，这里的准确筛选的主要依据是_______________________________________。

（3）按功能分，步骤③中培养基属于______________________培养基。

（4）科研人员从候选菌中初步筛选出产乳酸能力较强的四种菌株，再通过连续转接和液体发酵进行遗传稳定性检测，得到下表所示结果（单位：g/L），最终确定卫10为最优菌株，依据是___________。

传代次数	菌株
传代次数	卫10	卫32	卫56	卫69
2	70.78	71.23	70.52	69.24
5	70.23	69.52	67.46	65.56
8	69.58	62.16	60.52	61.53
11	70.75	55.69	52.42	55.72
14	69.42	42.28	40.22	44.38