[题目]基因工程的第一步是筛选获取目的基因.利用PCR技术获取目的基因是一种常用的手段.图示某DNA分子经切后.DNA片段自身环化并利用PCR技术扩增的部分过程.(1)PCR与生物体内DNA复制过程不同.解旋时不需要酶催化而是通过实现的.因此PCR技术使用的DNA聚合酶必须是的.(2)如果在某基因组中定位了一个目的基因X.其碱基序� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

【题目】基因工程的第一步是筛选获取目的基因，利用PCR技术获取目的基因是一种常用的手段。图示某DNA分子经切后，DNA片段自身环化并利用PCR技术扩增的部分过程。

（1）PCR与生物体内DNA复制过程不同，解旋时不需要_______________酶催化而是通过_______________实现的，因此PCR技术使用的DNA聚合酶必须是_______________的。

（2）如果在某基因组中定位了一个目的基因X，其碱基序列未知，但已知X临近区域的一段DNA序列，此时可利用图示方法进行目的基因的筛选和扩增。作用于图示多个酶切点的限制酶种类应_______________（相同/不同）。操作时根据图中的_______________设计引物，将含有目的基因的DNA片段克隆出来，为便于目的基因与载体结合，可在_______________添加特定的限制酶识别序列。

（3）实践中也常用RT-PCR技术扩增目的基因，这种技术是以RNA为模板。若利用RT-PCR技术扩增胰岛素基因，应选择_______________细胞提取RNA。

【答案】解旋酶 90～95℃高温处理耐高温（耐热或热稳定）相同已知序列两条引物胰岛B细胞

【解析】

PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术。其原理是DNA复制，需要模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶），以指数的方式扩增，即约2n。引物是一段短的单链RNA或DNA片段，可结合在核酸链上与之互补的区域，其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点。

（1）PCR与体内DNA复制的不同之处主要表现在温度环境的不同，在PCR中先用90～95℃高温处理的目的是使DNA变性（使DNA的两条链解开），而这一过程中在细胞内是通过解旋酶的催化实现的。所以PCR技术解旋不需要解旋酶，通过90～95℃高温处理来实现。PCR反应包含多次循环，每次循环包括变性、复性和延伸，PCR技术在较高温度下进行，因此需要耐高温（耐热或热稳定）的DNA聚合酶。

（2）根据图示，用PCR技术扩增X基因时，酶切后有自身环化现象，说明酶切后形成的末端碱基序列相同，所以作用于图示多个酶切点的限制酶种类应该相同。利用PCR技术扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物。题中目的基因X碱基序列未知，X临近区域的一段DNA序列已知。操作时需要根据图中已知序列的一段DNA序列设计引物。为了便于扩增后的X基因与质粒连接，常在两条引物上设计加入特定的限制酶识别序列，主要目的是使X基因能定向插入表达载体。

（3）RT-PCR是以mRNA作为模板扩增得到DNA的技术，若利用RT-PCR技术扩增胰岛素基因，需要在胰岛B细胞中提取mRNA，因为胰岛素基因只在胰岛B细胞中表达。

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①梦湖是一个生态系统，输入其中的总能量是___________________________。

②第4天到第7天期间，C0、C1、C2组藻类植物细胞数量下降的原因可能有___________。

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c．浮游动物摄食量大于藻类增殖量 d．输入系统的总能量减少

（2）研究同学还统计了各组水体中小型浮游动物的密度变化，结果如图2所示。大型溞与小型浮游动物的种间关系是________。据此分析图1中C4组对藻类抑制效果反而不如C3组的原因_____________________。

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