Question

转基因克隆猪已经在我国培育成功．研究组首先从猪胎儿皮肤中分离出纤维细胞，进行体外培育．通过电穿孔的方法将构建好的基因表达载体转入纤维细胞，经筛选后将基因纤维细胞进行体细胞克隆．接着，将重组胚胎移入代孕母猪体内，最终获得转基因克隆猪．请回答：
（1）在对纤维细胞进行培养时，需要在细胞培养液中添加一定量的

 

，以防止培养过程的污染，此外，应定期更换，防止对细胞自身造成危害．
（2）筛选转基因细胞时，需要利用基因表达载体中

 

的作用．
（3）在进行体细胞克隆前，先要从屠宰场收集猪卵巢，采集

 

，并在体外培养成熟．然后将转基因纤维细胞注入到

 

中，再经过一系列过程获得含有目的基因重组胚胎．
（4）为了

 

，可以对处于

 

阶段的胚胎进行均等分割．将重组胚胎移入到受体子宫中，由于受体子宫不会对外来胚胎发生

 

，并能与之建立正常的生理和组织上的联系，因次，重组胚胎能在受体子宫中继续发育成转基因克隆猪．

Answer 1

考点：动物细胞与组织培养过程,胚胎移植

专题：

分析：1、动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养．
2、胚胎移植的生理学基础：a．胚胎在移植前后所处的生理环境保持一致；b．哺乳动物的早期胚胎形成后处于游离状态；c．受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应；d．供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系，但供体胚胎的遗传特性不受任何影响．
3、基因工程的基本操作步骤主要包括四步：①目的基因的获取（从基因文库中获取、利用PCR技术体外扩增、化学合成法）；②基因表达载体的构建；③将目的基因导入受体细胞；④目的基因的检测与鉴定．标记基因的作用是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来．

解答： 解：（1）在对纤维细胞进行培养时，需要在细胞培养液中添加一定量的抗生素，以防止培养过程的污染，此外，应定期更换培养液，防止对细胞自身造成危害．
（2）筛选转基因细胞时，需要利用基因表达载体中标记基因的作用，筛选出含有目的基因的受体细胞．
（3）在进行体细胞克隆前，先要从屠宰场收集猪卵巢，采集卵母细胞，并在体外培养成熟．然后将转基因纤维细胞注入到去核卵母细胞中，再经过一系列过程获得含有目的基因重组胚胎．
（4）对处于桑椹胚或囊胚阶段的胚胎进行均等分割，可以提高重组胚胎的利用率．将重组胚胎移入到受体子宫中，由于受体子宫不会对外来胚胎发生免疫排斥反应，并能与之建立正常的生理和组织上的联系，因次，重组胚胎能在受体子宫中继续发育成转基因克隆猪．
故答案为：
（1）抗生素                培养液
（2）标记基因
（3）卵母细胞            去核卵母细胞
（4）提高重组胚胎的利用率       桑椹胚或囊胚      免疫排斥反应

点评：本题主要考查学生对知识的记忆和理解能力．胰蛋白酶只有在动物细胞培养中才会用，是因为动物细胞在分裂过程中会贴壁生长和接触性抑制，用胰蛋白酶处理后细胞间质后，细胞分散开才能分装到更多培养瓶中，而胚胎分割不用．