Question

16．常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，而自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，但是对酒精的耐受能力差．科学家利用基因工程培育了能利用这两种糖进行发酵且对酒精耐受能力强的酿酒酵母．
（1）将自然界中采集到的葡萄带回实验室，用无菌水将葡萄皮上的微生物冲洗到无菌的三角瓶中，然后将瓶中的液体用稀释涂布平板（平板划线）法接种于固体培养基上，在适宜的条件下培养，获得各种菌落．
（2）将培养基上的酵母菌菌株转接到以木糖为唯一碳源的培养基中，无氧条件下培养一周后，有些酵母菌死亡，说明这些酵母菌不能利用木糖发酵．从存活的酵母菌中提取DNA，经大量扩增获得目的基因．
（3）将目的基因连接到质粒上，该质粒具有的尿嘧啶合成酶基因可作为标记基因．将重组质粒导入酵母菌时，应选择缺乏尿嘧啶合成能力的酿酒酵母作为受体菌．
（4）将上述获得的转基因酿酒酵母接种在以葡萄糖和木糖为碳源的培养基中进行发酵能力测试．随着发酵的持续进行，若该酿酒酵母能够存活，说明它能利用葡萄糖和木糖产生酒精，且对酒精的耐受能力强，即说明所需菌株培育成功．

Answer 1

分析 1、接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法
2、根据题干信息“常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖”，则在以木糖为唯一碳源的培养基中死亡，“自然界中一些酵母菌能分解木糖产生酒精”说明这些酵母菌含有相关木糖发酵有关的酶的基因．酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，而自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，但是对酒精的耐受能力差，涉及微生物实验室培养的相关知识，科学家利用基因工程培育了能利用葡萄糖和木糖进行发酵且对酒精耐受能力强的酿酒酵母．
3、基因工程是为了培养能利用这两种糖进行发酵且对酒精耐受能力强的酿酒酵母，所以检测时应将培育获得的转基因酿酒酵母接种在含葡萄糖和木糖的培养基中进行酒精发酵能力测试，随着发酵的持续进行，若该酿酒酵母能够存活，说明它能利用葡萄糖和木糖产生酒精，且对酒精的难受能力强，即说明所需菌株培育成功．

解答 解：（1）接种微生物常用稀释涂布平板法和平板划线法．
（2）在以木糖为唯一碳源的培养基中，只有能分解木糖的酵母菌能生存，因此该培养基可以用来选择能分解木糖的酵母菌．
（3）利用质粒上的标记基因表达的标记性状可以判断目的基因是否成功导入受体细胞，故应该选择缺乏尿嘧啶合成能力的酿酒酵母作为受体菌．
（4）转基因酿酒酵母能利用这葡萄糖和木糖进行发酵且对酒精耐受能力强，故应该接种在以葡萄糖和木糖为碳源的培养基中进行发酵能力测试．随着发酵的持续进行，若该酿酒酵母能够存活，说明它能利用葡萄糖和木糖产生酒精，且对酒精的耐受能力强．
故答案为：
（1）稀释涂布平板（平板划线）
（2）以木糖为唯一碳源
（3）尿嘧啶合成
（4）葡萄糖    木糖     利用葡萄糖和木糖产生酒精，且对酒精的耐受能力强（合理即可）

点评 本题考查微生物培养和微生物的选择的相关知识，要求考生明确微生物的培养和微生物选择的方法，属于考纲识记和理解层次的考查，这类试题需要考生在平时的学习过程中学会构建知识网络结构．