Question

4．复合型免疫缺陷症（SCID）患者缺失ada基囚．利用基因疗法将人正常ada基因转入患者自身T细胞．可改善患者的免疫功能．如图显示该基因疗法的两个关键步骤．回答下列问题：
（1）图中所示获取正常ada基因的方法是从基因文库中获取目的基因，若要大量获取该基因，可通过PCR技术迸行扩增．与细胞内DNA复制过程相比，PCR技术的不同点有不需要解旋酶、需要热稳定DNA聚合酶（答出两点）
（2）步骤②是构建基因表达载体．在该步骤中，病毒作为运载体起作用，需使用的工具酶有限制酶和DNA连接酶．
（3）完成步骤②后，在体外将人正常ada基因导入患者自身的T细胞．此后，在将该T细胞重新输入患者体内之前，还必须完成哪两项操作？将目的基因导入受体细胞、目的基因的鉴定与检测．

Answer 1

分析 1、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．
2、分析题图：图示显示基因疗法的两个关键步骤，其中①表示获取目的基因，②表示构建基因表达载体．

解答 解：（1）图中所示获取目的基因的方法是从基因文库中获取目的基因；与细胞内DNA复制过程相比，PCR技术的不同点有：不需要解旋酶、需要热稳定DNA聚合酶．
（2）步骤②是构建基因表达载体．在该步骤中，病毒作为运载体起作用；构建基因表达载体时，首先需要限制酶切割运载体和含有目的基因的外源DNA分子，其次需要DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组DNA分子．
（3）基因工程的基本操作步骤主要包括四步：①目的基因的获取；②基因表达载体的构建；③将目的基因导入受体细胞；④目的基因的检测与表达．因此完成步骤②后，在体外将人正常ada基因导入患者自身的T细胞．此后，在将该T细胞重新输入患者体内之前，还必须完成的两项操作为：将目的基因导入受体细胞、目的基因的鉴定与检测．
故答案为：
（1）从基因文库中获取目的基因         不需要解旋酶、需要热稳定DNA聚合酶
（2）构建基因表达载体       运载体      限制酶和DNA连接酶
（3）将目的基因导入受体细胞、目的基因的鉴定与检测

点评 本题结合图解，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、概念、操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节．