Question

【题目】“地沟油，城市下水道里悄悄流淌的垃圾”。地沟油最大的来源为城市饭店下水道的隔油池。对地沟油的处理是一个难题，用脂肪酶处理地沟油具有广泛的应用前景。为获得高产脂肪酶的菌株，并将之用于产业化，某研究小组进行了一些实验。请回答下列相关问题：

（1）欲分离筛选出能分泌脂肪酶的细菌，应配制以___________为唯一碳源的培养基，这种培养基从功能上看属于___________培养基。

（2）经过稀释，在平板上接入0.1mL稀释液并涂布，经适当时间培养后，在平板上计数菌落，据此可计算出每毫升培养液中的活菌数。这种计数方法得到的结果一般比实际值偏小，原因可能是___________。

（3）经上述实验得到如下表所示的结果，为保证结果准确，一般选择___________稀释倍数的平板进行统计。有同学认为稀释操作时，可以将1mL培养液加适量无菌水直接稀释至上述稀释倍数，这样可以简化步骤，省去梯度稀释的麻烦。该方法___________(填“合理”或“不合理”)，因为___________。

（4）如果脂肪酶的产业化需要其活性在固定化处理时不受损失，且在多次重复使用后仍能维持稳定的酶活性，则应选择下表中的___________法固定化工艺。使用分泌脂肪酶细菌与固定化脂肪酶进行生产，都需要适宜的___________(填序号)。

①温度 ②水 ③营养 ④pH

酶固定化方法	吸附法	共介结合法	包埋法
制备难易	易	难	难
酶活力损失	小	大	小
酶与载体的结合能力	较弱	强	强
成本	低	高	中
对底物和产物的要求	无特殊要求	无特殊要求	分子量需比较小

Answer 1

【答案】脂肪 选择 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 104 不合理 在做梯度稀释之前不能确定这个稀释倍数的每个平板的菌落是否在30~300之间 包埋 ①②④

【解析】

1、培养基按功能划分：选择培养基和鉴别培养基；

选择培养基：（1）特点：培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需的微生物的生长。（2）应用：培养、分离出特定微生物，如养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素；以脂肪为唯一碳源的培养基用于分离含有脂肪酶的细菌。

鉴別培养基：（1）特点：根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品。（2）应用：鉴别不同种类的微生物，如可用伊红-美蓝培养基鉴別饮用水或乳制品中是否含有大肠杆菌。

2、微生物的计数方法：包括显微镜直接计数法和间接计数法(常用稀释涂布平板法)。稀释涂布平板法的理论依据：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落即代表一个活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在30-300的平板进行计数，每个稀释倍数至少涂布3个平板进行计数，取平均值。

（1）欲分离筛选出能分泌脂肪酶的细菌，要在培养基中加入特定的碳源，应配制以脂肪为唯一碳源的培养基，这种培养基从功能上看属于选择培养基。

（2）在平板上接入桸释液并涂布，培养后，在平板上计数菌落，据此计算每毫升培养液中的活菌数。由于可能有的菌落是由2个及2个以上的细菌形成的，也可能涂布器上还残留少量细菌，故这种计数方法得到的结果一般比实际值偏小。

（3）为保证结果准确，一般选择104稀释倍数，稀释操作时，将1m培养液加通量无菌水直接稀释至上述稀释倍数，这种方法不合理，因为在做梯度稀释之前不能确定这个稀释倍数的每个平板的菌落是否在30～300之间。

（4）包埋法固定化工艺可以在需要酶活性在固定处理时不受损失，且多次重复使用后仍能维持酶活性的稳定。酶与细菌均需要适宜的温度、水和PH值。