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    11．大肠杆菌菌群数量是衡量食品安全的一项重要指标．下面是检测食品中大肠菌群的常用方法：稀释培养测数法（MPN）．
    （一）实验原理
    （1）大肠杆菌菌群是一群能发酵乳糖、产酸产气的无芽孢杆菌．
    （2）乳糖胆盐发酵管中溴甲酚紫的作用：用溴甲酚紫作指示剂，该指示剂中性时呈蓝紫色，酸性时呈黄色．胆盐的作用：胆盐对很多杂菌有抑制作用，但是对大肠杆菌不造成影响．
    （3）伊红美蓝能使大肠杆菌菌落呈深紫色．
    （二）实验试剂及器材（略）
    （三）实验过程
    （1）检样稀释
    ①将检样25mL放于有225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液．
    ②用1mL灭菌吸管吸取1：10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内，振摇试管混匀，做成1：100的稀释液．按上述操作依次做10倍梯度稀释液，每稀释一次，换用1支1mL灭菌吸管．
    （2）乳糖发酵试验
    根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度，接种3管乳糖胆盐发酵管．置于36℃温箱内，培养24h，若①，则可报告为大肠菌群阴性；若②，则可报告为大肠菌群阳性．
    （3）分离培养
    将大肠菌群阳性的发酵管分别转种在③琼脂平板上，置36℃温箱内，培养24h，然后取出，观察④．
    （4）报告
    根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100mL（g）大肠菌群的MPN值．
    请回答下列问题：
    ①请把上述空缺步骤补充完整：
    ①所有发酵管中溶液呈蓝紫色（或都不产气）②所有发酵管中溶液呈黄色（或有产气者）③伊红美蓝④菌落颜色
    ②培养基中必须含有的基本成分是水、无机盐、碳源、氮源．
    ③在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养24h，这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格．
    ④若步骤三采用平板划线法分离培养大肠杆菌，操作时，接种环应通过灼烧灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线．这样做的目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落．

    分析 1、微生物培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求．
    2、鉴别、培养大肠杆菌可使用伊红-美蓝培养基，菌落呈黑色或紫黑色有金属光泽．

    解答 解：（1）根据实验原理可知，大肠杆菌菌群是一群能发酵乳糖、产酸产气的无芽孢杆菌，用溴甲酚紫作指示剂，该指示剂中性时呈蓝紫色，酸性时呈黄色，如果所有发酵管中溶液呈蓝紫色，表明溶液呈中性，即说明大肠杆菌不能产酸产气，则可报告为大肠菌群阴性；如果所有发酵管中溶液呈黄色，表明溶液呈酸性，说明大肠杆菌能够产酸产气，则可报告为大肠菌群阳性．
    鉴别、培养大肠杆菌可使用伊红-美蓝培养基，菌落呈黑色或紫黑色有金属光泽．
    （2）培养基中必须含有的基本成分是水、无机盐、碳源、氮源．
    （3）在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养24h，这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格．
    ④若步骤三采用平板划线法分离培养大肠杆菌，操作时，接种环应通过灼烧灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线．这样做的目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落．
    故答案为：
    （1）①所有发酵管中溶液呈蓝紫色（或都不产气）②所有发酵管中溶液呈黄色（或有产气者） ③伊红美蓝   ④菌落颜色
    （2）水、无机盐、碳源、氮源    
    （3）检测培养基平板灭菌是否合格
    （4）灼烧    将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落

    点评 本题考查了微生物分离与培养的有关知识，要求考生能够根据实验原理补充实验步骤，识记培养基的主要成分，掌握微生物分离与纯化的一般方法．

    练习册系列答案
    年级 高中课程 年级 初中课程
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    科目：高中生物 来源： 题型：选择题

    2．下列有关培养基的叙述正确的是（　　）
    A．只要培养基中有水、碳源、氮源和无机盐等营养成分，噬菌体或大肠杆菌都能正常生长繁殖
    B．微生物在液体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个菌落
    C．固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基
    D．在培养基中加入抗生素可抑制乳酸菌的发酵

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    科目：高中生物 来源： 题型：解答题

    2．破伤风是人畜共患的一种创伤性、中毒性疾病，破伤风类毒素单克隆抗体可以为破伤风的快速检测及治疗带来光明．如图是我国科学工作者进行的破伤风类毒素单克隆抗体的制备过程示意图，请据图回答：

    （1）单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是特异性强，灵敏度高．
    （2）由图可看出，单克隆抗体制备过程运用了动物细胞培养和动物细胞融合等技术手段，前一过程需置于含95%空气加5%CO2的混合气体的培养箱中进行培养，其中CO2的作用是维持培养液的pH．
    （3）经过程④诱导操作后，免疫小鼠获得的每种B淋巴细胞能产生1种抗破伤风类毒素抗体．
    （4）过程⑤可筛选出杂交瘤细胞，根据培养基的用途分类，HAT培养基属于选择培养基．
    （5）过程⑥筛选的是能产生特定抗体的杂交瘤细胞，具体做法是：将杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔的细胞培养板上，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖，然后通过ELISA法（又称酶联免疫吸附试验法）检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔．如果阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，应将该阳性孔中的细胞适当稀释，重复3-4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞．

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    科目：高中生物 来源： 题型：解答题

    19．红树林生长于陆地与海洋交界带的滩涂浅滩，形成了陆地向海洋过度的特殊生态系统．回答与红树林相关的问题：
    （1）对滩涂沙土中小动物类群丰富度的研究，应采取的调查方法是取样器取样法．
    （2）科研人员根据调查到的生物类群绘制出碳循环图解（如图）．
    ①碳在无机环境和生物群落之间的循环主要以CO2形式进行．
    ②从生态系统组成成分看，A属于大气中的二氧化碳库，C属于分解者．若陆地向海洋排出大量含重金属的污水，那么该生态系统中在体内积存重金属污染物浓度最高的生物是B（填字母）．
    ③科研人员观察到大白鹭处在图中的最高营养级，则大白鹭每增重0.1kg，至少需要生产者12.5kg．
    （3）红树林中不同种群间的个体，在自然条件下不能进行基因交流的现象叫做隔离．

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    科目：高中生物 来源： 题型：解答题

    6．如图表示用于预防和治疗禽流感的单克隆抗体生产过程，请回答下列问题：

    （1）若A细胞是小鼠的骨髓瘤细胞，则B细胞取自感染禽流感病毒的动物或人　体内的B淋巴细胞，促进d过程的诱导剂是聚乙二醇或灭活的病毒．
    （2）假设仅考虑两个细胞的融合，则可形成3种类型的C细胞，因此需用选择性培养基筛选出具有既能无限增殖又能产生特异性抗体特点的D细胞用于培养．D细胞的名称是杂交瘤细胞．
    （3）在细胞培养所用的培养基中除需要加入糖、氨基酸、促生长因子、无机盐和微量元素外，通常还需加入血清、血浆等一些天然成分．
    （4）目前注射禽流感疫苗是预防禽流感的一种措施．决定禽流感病毒在人体细胞中增殖变化的物质是禽流感病毒的RNA．

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    科目：高中生物 来源： 题型：选择题

    16．与酵母菌相比，硝化细菌具有的特点是（　　）
    A．无线粒体，只能通过无氧呼吸获得能量
    B．无叶绿体，只能摄取现成的有机物来生活
    C．无细胞核，只能通过无丝分裂方式繁殖后代
    D．无染色体，只进行基因水平的变异

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    科目：高中生物 来源： 题型：选择题

    3．下列说法不正确的是（　　）
    A．亚硝酸盐在特定的条件下才会变成致癌物亚硝胺
    B．工业硅肺是因为吞噬细胞中“中心体”受损造成的
    C．同一种酶可以在分化程度不同的活细胞中存在
    D．泡菜中亚硝酸盐含量的检测方法是比色法，生成玫瑰红颜色

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    18．下列关于细胞核的叙述中，正确的是（　　）
    A．核膜为双层膜，外面的外表面附着着许多核糖体
    B．不同的细胞内，核仁的大小和数量都是一定的
    C．所有的真核细胞都含有细胞核
    D．核孔是高分子物质任意通过细胞核的通道

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    两亲本杂交，子代出现3：3：1：1的性状分离比，则亲本是

    A．EeFf×eeFf B．EeFf×EeFf

    C．Eeff×eeFf D．EeFf×EeFF

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