Question

【题目】某研究小组欲对比人手上不同部位微生物的分布情况。实验步骤如下：

①准备工作：配置培养基（成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、．X、H2O） ，制作无菌平板。

②采样：分别用蘸有无菌生理盐水的棉拭子涂擦被检对象手的手掌、手指、手背3个部位，擦完后，将手接触部分剪去，将棉拭子放入装有10毫升无菌生理盐水的试管内送检。

③检测：将上述样液充分振摇，将无菌吸管分别吸取1ml待检样液接种于无菌平板；将各组平板置于37℃恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。

回答下列问题：

（1）该培养基中微生物所需的碳源是_________。该培养基中的成分X通常是_________________。配制培养基的基本步骤是计算—称量—溶化—__________—倒平板。

（2）若培养得到的菌落数目偏多，难以统计，应在第3步增加___________步骤。

（3）某同学在统计某一实验组的3个平板菌落时，发现一个平板所得数据和另外两个偏差较大，在做原始记录时对该数据应___________（选填下列选项前的字母）。

A．舍弃 B．修改 C．如实填写

为了检验该组相关数据的可靠性，还应_________________________。

（4）正是因为人手上有很多细菌，因此微生物的实验室培养过程中，通常用75%的酒精对手进行消毒，而不用95%的酒精，其原因是___________________________。

Answer 1

【答案】牛肉膏、蛋白胨 琼脂 灭菌 梯度稀释 C 重复实验 酒精能使蛋白质变性，但95%酒精浓度过高，会使细菌周围形成一层由凝固蛋白质组成的保护膜，使酒精分子不能进入细菌，达不到杀死细菌的作用

【解析】

统计菌落数目的方法：

（1）显微镜直接计数法

①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；②方法：用计数板计数；③缺点：不能区分死菌与活菌。

（2）间接计数法（活菌计数法）

①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活

②操作

a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性。

b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。

③计算公式：每克样品中的菌株数=（c÷V）×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。

（1）牛肉膏和蛋白胨都含有蛋白质的水解产物，即可以作为氮源，也可以作为碳源。平板为固体培养基，故需要加入琼脂，即培养基的成分X为琼脂。配置好培养基后，需将培养基和培养皿进行灭菌，再倒平板，即配制培养基的基本步骤是计算—称量—溶化—灭菌—倒平板

（2）若培养得到的菌落数目偏多，难以统计，应在第3步增加梯度稀释步骤。

（3）发现一个平板所得数据和另外两个偏差较大，在做原始记录时也应对该数据如实填写，C正确，故选C。为了保证实验可靠，需要重复实验（或设置多个平行实验）。

（4）通常用75%的酒精对手进行消毒，而不用95%的酒精，其原因是酒精能使蛋白质变性，但95%酒精浓度过高，会使细菌周围形成一层由凝固蛋白质组成的保护膜，使酒精分子不能进入细菌，达不到杀死细菌的作用。