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    14．有人尝试制备始旋链霉菌（能生产普那霉素的一种原核放线菌）的原生质体，并利用其孢子和原生质体进行选育普那霉素高产菌株的实验．采用酶解法制备始旋链霉菌原生质体时，先要明确酶解时间与原生质体制备效果间的关联．探究步骤如下：
    第1步：取生长旺盛的始旋链霉菌菌丝，酶解后用一定量的缓冲液稀释后涂布在平板上，30℃培养7天后，统计菌落数．
    第2步：计算时间对原生质体制备和再生的影响，绘制成下图1所示曲线．
    请据图回答：

    （1）本实验所用的酶，不适用于制备BC的原生质体．
    A．大肠杆菌细胞  B．番茄叶肉细胞 C．酵母菌
    （2）鉴定原生质体制备效果的常见方法是将部分原生质体放在低渗（“等渗”、“高渗”或“低渗”）溶液中，观察其形态变化．而原生质体的计数统计常借助光学显微镜、盖玻片和血细胞计数板等光学仪器．
    （3）上述实验的第1步中，酶解后的稀释必须用缓冲液的原因是维持酶解后的原生质体的正常形态和功能，若未经稀释，直接涂布可能造成的结果是平板上菌落会重叠影响统计计数．
    （4）根据上图1可见，随着酶解时间增加，原生质体的再生率变化趋势是逐渐下降．结合酶解时间对原生质体制备率和再生率的影响，应当选择的最佳酶解时间约为90min．
    （5）用紫外线分别处理始旋链霉菌孢子、原生质体后，统计各组菌株的普那霉素产量，结果如上图2．诱变后效果最好的是丙组，可能的原因是原生质体培养过程中细胞分裂旺盛，紫外线引起突变的概率大．

    分析 分析图1：随着酶解时间增加，原生质体的再生率变化趋势是逐渐下降，80min后原生质体的再生率保持一段时间稳定，但是原生质体的制备率仍在增加．
    分析图2：诱变后效果最好的是丙组．

    解答 解：（1）由题干分析可知，始旋链霉菌是一种原核生物，真菌、原核生物和植物细胞壁的成分不同，因此，本实验所用的酶不适用于制备植物和酵母菌的原生质体．
    （2）观察其原生质体的破裂情况，可将自备的原生字体放在低渗溶液中观察其吸水胀破的情况，原生质体的计数可用血细胞计数板进行．
    （3）酶解后的稀释用的缓冲液应为原生质体的等渗溶液，以便于保存其完整的形态；不经稀释直接涂布，则可能军也较多易导致菌落粘连而影响计数．
    （4）由图1可知随着酶解时间增加，原生质体的再生率变化趋势是逐渐下降，80min后原生质体的再生率保持一段时间稳定，但是原生质体的制备率仍在增加，因此较80min而言，90min较适宜．
    （5）诱变后效果最好的是丙组，可能的原因是原生质体培养过程中细胞分裂旺盛，紫外线引起突变的概率大（没有细胞壁阻挡，紫外线衰减少）．
    故答案为：
    （1）BC
    （2）低渗     血细胞计数板（血球计数板）
    （3）维持酶解后的原生质体的正常形态和功能         平板上菌落会重叠影响统计计数
    （4）逐渐下降（或99min前下降速度逐渐减慢，90min后逐渐下降）      90
    （5）原生质体培养过程中细胞分裂旺盛，紫外线引起突变的概率大（没有细胞壁阻挡，紫外线衰减少）

    点评 本题主要考查原生质体制备的相关知识，对学生审题和图形分析能力要求较高．

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