Question

【题目】人血清白蛋白（HSA）具有重要的医用价值，只能从血浆中制备。如图是以基因工程技术获取重组HSA（rHSA）的两条途径。

（1）获取HSA基因，首先需采集人的血液，提取________________合成总cDNA，然后以DNA为模板，采用PCR技术扩增HSA基因。如图中箭头表示一条引物结合模板的位置及扩增方向，请用箭头在方框内标出标出另一条引物的位置及扩增方向。

（2）启动子通常具有物种及组织特异性，构建在水稻胚乳细胞内特异表达rHSA的载体，需要选择的启动子是________________（填写字母，单选）。启动子的作用是________________。

A.人血细胞启动子 B.水稻胚乳细胞启动子 C.大肠杆菌启动子D.农杆菌启动子

（3）利用农杆菌转化水稻受体细胞时常添加酚类物质，其目的是________________。

（4）人体合成的初始多肽，需要经过膜系统加工形成正确的空间结构才有活性。在人体内参与初始HSA多肽加工的细胞器有________________（至少写出两种）。与途径II相比，选择途径获取rHSA的优势________________。

（5）为证明rHSA具有医用价值，须确认rHSA与________________的生物学功能一致。

Answer 1

【答案】总RNA（或 mRNA） B 是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动（目的）基因转录出mRNA 吸引农杆菌移向水稻受体细胞，有利于目的基因成功转化 内质网、高尔基体、线粒体 水稻是真核生物，具有膜系统，能对初始rHSA多肽进行高效加工 HSA

【解析】

1.目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
2.基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

3.将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
4.目的基因的检测与鉴定：(1)分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。(2)个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。据此答题。

（1）为获取HSA基因，首先需采集人的血液，提取mRNA通过反转录法合成总cDNA，然后以cDNA为模板，采用PCR技术扩增HSA基因。由于DNA两条链是反向平行的，复制时也是方向相反，如图中箭头表示一条引物结合模板的位置及扩增方向，则另一条引物位于另一条链的相反一端。如图所示。

（2）启动子是一段有特殊结构的DNA片段，是RNA聚合酶识别和结合的部位，通常具有物种及组织特异性，构建在水稻胚乳细胞内特异表达rHSA的载体，需要选择的启动子是水稻胚乳细胞启动子，即B正确。启动子的作用是是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动（目的）基因转录出mRNA。

（3）利用农杆菌转化水稻受体细胞的过程中，需添加酚类物质，其目的是吸引农杆菌移向水稻受体细胞，有利于目的基因成功转化。
（4）在人体内参与初始HSA多肽加工的细胞器有内质网、高尔基体、线粒体（提供能量）。由于大肠杆菌为原核生物，无生物膜系统，而水稻为真核生物，具有生物膜系统，故在人体合成的初始HSA多肽，与途径Ⅱ相比，选择途径I获取rHSA的优势是，水稻是真核生物，具有膜系统，能对初始rHSA多肽进行高效加工。
（5）为证明rHSA具有医用价值，需对基因工程的产物进行鉴定，即确认rHSA与HSA的生物学功能一致。