Question

10．水污染是全球性的环境问题，微生物降解是水污染治理的有效手段之一．聚乙烯醇（PVA）是存在于化工污水中的一种难以降解的大分子有机物，PVA分解菌能产生PVA酶分解PVA，PVA与碘作用时能产生蓝绿色复合物，当PVA被分解时蓝绿色复合物消失，形成白色透明斑，请回答下列问题：
（1）要从土壤中筛选出能高效分解PVA的细菌，应采用以聚乙烯醇（或PVA）作为唯一的碳源的选择培养基，实验中还应设置对照组．将菌液稀释相同的倍数，对照组培养基上生长的菌落数目应明显多于（多于/少于）选择培养基上的数目，从而说明选择培养基具有筛选作用．
（2）要测定土壤稀释液中微生物的数目，可在显微镜下用血细胞（血球）计数板直接计数．若将100ml含有PVA分解菌的土壤样品溶液稀释10⁴倍后，取0.1ml稀释液均匀涂布在选择培养基表面，测得菌落数的平均值为160个，空白对照组平板上未出现菌落，则100ml原菌液中有PVA分解菌1.6×10⁹个，该方法的测量值与实际值相比一般会偏小（偏大/偏小/相等）．
（3）要鉴定分离出的细菌是否为PVA分解菌，培养PVA分解菌的培养基中除了加入必需的营养物质外还需要加入碘用于鉴别PVA分解菌．要比较不同菌株降解PVA能力的大小，用含相同PVA浓度的上述培养基来培养不同菌株，一定时间后，通过测定白色透明斑的大小（或直径）来确定不同菌株降解PVA能力的大小．
（4）提取橘皮精油，常采用压榨法而不用水蒸汽蒸馏法，原因是橘皮精油的有效成分在用水蒸气蒸馏时会发生部分水解，又会产生原料焦糊等问题．

Answer 1

分析 1、选择培养基是根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选率．
2、统计菌落数目的方法
（1）显微镜直接计数法：①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；②方法：用计数板计数； ③缺点：不能区分死菌与活菌．
（2）间接计数法（活菌计数法）
 ①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌．通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌．
②操作
a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性．
b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数．
③计算公式：每克样品中的菌株数=（c÷V）×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数．

解答 解：（1）分析题意可知，要从土壤中筛选出能高效分解PVA的细菌，应采用以聚乙烯醇（或PVA）作为唯一的碳源的选择培养基，实验中还应设置对照组．将菌液稀释相同的倍数，对照组培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，从而说明选择培养基具有筛选作用．
（2）要测定土壤稀释液中微生物的数目，可在显微镜下用血细胞（血球）计数板直接计数．若将100ml含有PVA分解菌的土壤样品溶液稀释10⁴倍后，取0.1ml稀释液均匀涂布在选择培养基表面，测得菌落数的平均值为160个，空白对照组平板上未出现菌落，则100ml原菌液中有PVA分解菌=160÷0.1×10⁴×100=1.6×10⁹个．由于两个或两个以上的细菌在一起时只能长成一个菌落，因此该方法的测量值与实际值相比一般会偏小．
（3）根据题意可知“PVA分解菌能产生PVA酶分解PVA，PVA与碘作用时能产生蓝绿色复合物，当PVA被分解时蓝绿色复合物消失，形成白色透明斑”，因此要比较不同菌株降解PVA能力的大小，用含相同PVA浓度的上述培养基来培养不同菌株，一定时间后，通过测定白色透明斑的大小（或直径）来确定不同菌株降解PVA能力的大小．
（4）提取橘皮精油时，由于橘皮精油的有效成分在用水蒸气蒸馏时会发生部分水解，又会产生原料焦糊等问题，因此常采用压榨法而不用水蒸汽蒸馏法．
故答案为：
（1）聚乙烯醇（或PVA）     多于
（2）血细胞（血球）    1.6×10⁹       偏小
（3）白色透明斑的大小（或直径）
（4）压榨法   　橘皮精油的有效成分在用水蒸气蒸馏时会发生部分水解，又会产生原料焦糊等问题

点评 本题考查了微生物的分离与培养的有关知识，要求掌握选择培养基应用，能够根据题干信息确定培养基成分，掌握微生物分离与计数的方法．