Question

【题目】内皮素（ET）是一种含21个氨基酸的多肽．内皮素主要通过与靶细胞膜上的内皮素受体结合而发挥生物学效应．ETA是内皮素的主要受体，科研人员试图通过构建表达载体，实现ETA基因在细胞中高效表达，为后期ETA的体外研究奠定基础．其过程如图（图中SNAP基因是一种荧光蛋白基因，限制酶ApaⅠ的识别序列为C↓CCGGG，限制酶XhoⅠ的识别序列为C↓TCGAG）．请分析回答：
（1）完成过程①需要的酶是 ．
（2）过程③中，限制酶XhoⅠ切割DNA，使键断开，形成的黏性末端是 ． 用两种限制酶切割，获得不同的黏性末端，其主要目的是 ．
（3）过程④中需要酶，去构建重组质粒．过程⑥中，要用预先处理大肠杆菌，使其处于容易吸收外界的DNA．
（4）利用SNAP基因与ETA基因结合构成融合基因，目的是 ．
（5）人皮肤黑色素细胞上有内皮素的特异受体，内皮素与黑色素细胞膜上的受体结合后，会刺激黑色素细胞的分化、增殖并激活酪氨酸酶的活性，从而使黑色素急剧增加．美容时可以利用注射ETA达到美白祛斑效果，试解释原因：抑制了内皮素对黑色素细胞的增殖和黑色素的形成．

Answer 1

【答案】
（1）逆转录酶
（2）磷酸二酯；；可以使目的基因定向连接到载体上
（3）DNA连接酶；Ca2+（或CaCl2）
（4）检测ETA基因能否表达及表达量
（5）ETA能与内皮素结合，减少了内皮素与黑色素细胞膜上内皮素受体的结合
【解析】解：（1）图中1过程是逆转录过程，需要逆转录酶的催化；与过程2相比，该过程特有的碱基配对方式是U﹣A．（2）过程3利用限制酶XhoⅠ切割DNA获得目的基因的过程，限制酶使得DNA的磷酸二酯键断开，形成的黏性末端是﹣AGCT（或 ）．图中显示利用了两种限制酶切割目的基因和载体，从而获得了不同的黏性末端，可以使目的基因定向连接到载体上．（3）基因表达载体构建构成中，需要用DNA连接酶连接目的基因和质粒．过程6重组质粒导入受体细胞的过程，要用Ca2+（或CaCl2）预先处理大肠杆菌，使其处于容易吸收外界DNA的感受态．（4）利用SNAP基因与ETA基因结合构成融合基因，可以检测ETA基因能否表达及表达量．（5）ETA能与内皮素结合，减少了内皮素与黑色素细胞膜上内皮素受体的结合，抑制了内皮素对黑色素细胞的增值和黑色素的形成，从而达到美容的目的． 所以答案是：（1）逆转录酶（2）磷酸二酯 可以使目的基因定向连接到载体上（3）DNA连接酶 Ca2+（或CaCl2）（4）检测ETA基因能否表达及表达量（5）ETA能与内皮素结合，减少了内皮素与黑色素细胞膜上内皮素受体的结合
【考点精析】通过灵活运用基因工程的原理及技术，掌握基因工程的原理是利用DNA重组技术即可以解答此题．