Question

2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白（GFP）方面做出突出贡献的科学家。绿色荧光蛋白能在蓝色或紫外光的激发下发出荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。下图为我国首例绿色荧光蛋白（GFP）转基因克隆猪的培育过程示意图，据图回答：

（1）图中通过过程①、②形成重组质粒，需要限制酶切取目的基因、切割质粒。限制酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC—,限制酶II的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶I的一个切点，在目的基因的两侧各有一个酶II的切点。

①请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。

②请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。

③在DNA连接酶作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来＿＿＿＿，理由是：＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞时，采用最多也是最有效的方法是＿＿＿＿＿＿＿＿。

（3）从分子水平上，检测绿色荧光蛋白基因是否插入到猪胎儿成纤维染色体的DNA上，检测方法是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿，检测绿色荧光蛋白基因是否表达，检测方法是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

（4）如果将切取的GFP基因与抑制小猪抗原表达的基因一起构建到载体上，GFP基因可以作为表达载体上的＿＿＿＿＿＿＿＿。获得的转基因猪，可以解决的医学难题是可以避免＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。

Answer 1

每空2分，共18分）

（1）

①

②

③可以连接。因为由两种不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的（或是可以互补）

（2）显微注射技术

（3）DNA分子杂交技术      抗原-抗体杂交

（4）标记基因     发生免疫排斥反应。